免疫熒光是解析生物分子定位的有力工具。它能夠在細(xì)胞或組織的復(fù)雜環(huán)境中,精確地指出特定生物分子的所在之處。在發(fā)育生物學(xué)研究中,胚胎發(fā)育過(guò)程涉及到眾多基因的表達(dá)和調(diào)控。免疫熒光可以標(biāo)記那些在胚胎發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的蛋白質(zhì)。例如,在神經(jīng)管發(fā)育過(guò)程中,標(biāo)記參與神經(jīng)管形成的特定蛋白,觀察其在胚胎不同發(fā)育階段的分布變化。這有助于揭示胚胎發(fā)育的分子機(jī)制,了解各個(gè)細(xì)胞在發(fā)育過(guò)程中的分化方向和功能特化。在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究中,免疫熒光可以顯示信號(hào)分子在細(xì)胞內(nèi)的定位。當(dāng)細(xì)胞受到外界信號(hào)刺激時(shí),細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路會(huì)被***,各種信號(hào)分子會(huì)發(fā)生磷酸化、移位等變化。通過(guò)免疫熒光標(biāo)記這些信號(hào)分子,就可以直觀地看到它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的位置變化,從而深入研究細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的過(guò)程和調(diào)控機(jī)制。免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn),清晰呈現(xiàn)雙色熒光,揭示分子關(guān)聯(lián)。collagenX(COL-10)免疫
在慢性阻塞性肺疾?。–OPD)的研究中,多重免疫組化有助于剖析疾病的病理生理過(guò)程??梢詷?biāo)記氣道上皮細(xì)胞的標(biāo)志物,如細(xì)胞角蛋白,同時(shí)標(biāo)記炎癥細(xì)胞的標(biāo)志物,如 CD8 + T 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞,以及與氣道重塑相關(guān)的生長(zhǎng)因子,如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 - β1(TGF - β1)。在 COPD 患者中,氣道炎癥和重塑是主要特征。通過(guò)觀察這些標(biāo)志物的變化,可以了解氣道上皮細(xì)胞的損傷情況、炎癥細(xì)胞在氣道中的浸潤(rùn)和分布,以及 TGF - β1 是如何促進(jìn)氣道平滑肌細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)沉積,導(dǎo)致氣道重塑的。nestin免疫組化IHC免疫熒光雙標(biāo)操作,映射兩種靶標(biāo),推動(dòng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)展。
免疫熒光技術(shù)主要是依據(jù)抗原抗體反應(yīng)的基本原理來(lái)實(shí)施的。具體而言,就是首先將已知的抗原或抗體精心標(biāo)記上熒光素,進(jìn)而制作成熒光抗體,然后再把這種熒光抗體(或者抗原)當(dāng)作極為靈敏的探針,去對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)展開(kāi)檢測(cè)。在組織或細(xì)胞內(nèi)所形成的抗原抗體復(fù)合物上面含有被標(biāo)記的熒光素,當(dāng)利用熒光顯微鏡來(lái)仔細(xì)觀察標(biāo)本時(shí),熒光素會(huì)在受到外來(lái)激發(fā)光的強(qiáng)烈照射下,發(fā)出異常明亮的熒光(呈現(xiàn)出充滿生機(jī)的黃綠色或鮮艷的橘紅色),通過(guò)這樣的方式,就能夠清晰地看見(jiàn)熒光所在的組織細(xì)胞,從而得以準(zhǔn)確地確定抗原或抗體的性質(zhì)、精細(xì)地進(jìn)行定位,并且還能夠借助定量技術(shù)來(lái)精確測(cè)定其含量。比如說(shuō),在一些對(duì)于信號(hào)分析有著極高要求的科學(xué)研究中,免疫熒光檢測(cè)的定量熒光信號(hào)能力能夠幫助研究者精細(xì)地量化各種細(xì)微變化,獲取到關(guān)鍵的數(shù)據(jù)信息;其復(fù)用能力在面對(duì)復(fù)雜的生物樣本中多種蛋白質(zhì)需要同時(shí)檢測(cè)的情況時(shí),能夠高效地完成任務(wù),提供完整的分析結(jié)果;而熒光染料的光穩(wěn)定性使得即使在長(zhǎng)時(shí)間的實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,依然能夠保證熒光信號(hào)的穩(wěn)定和清晰,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
熒光色素:四甲基異硫氰酸羅丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate,TRITC),其結(jié)構(gòu)式如下所示,比較大吸收光波長(zhǎng)為 550nm,比較大發(fā)射光波長(zhǎng)為 620nm,呈現(xiàn)出橙紅色熒光。和 FITC 的翠綠色熒光形成鮮明對(duì)比,能夠配合用于雙重標(biāo)記或者對(duì)比染色。它的異硫氰基能夠和蛋白質(zhì)相結(jié)合,不過(guò)熒光效率比較低。免疫熒光技術(shù)也被稱作熒光抗體技術(shù),屬于標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展相對(duì)較早的一種。很早的時(shí)候就有一些學(xué)者嘗試把抗體分子與某些示蹤物質(zhì)進(jìn)行結(jié)合,借助抗原抗體反應(yīng)來(lái)對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原物質(zhì)進(jìn)行定位,而該技術(shù)就是在此基礎(chǔ)上建立起來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。提供多種熒光相關(guān)光譜顯微鏡標(biāo)記試劑。
在腎移植的研究中,多重免疫組化是評(píng)估移植腎狀況的有力工具。可以標(biāo)記供體和受體的組織相容性抗原(HLA),以監(jiān)測(cè)是否存在免疫排斥反應(yīng)。同時(shí)標(biāo)記腎組織中的免疫細(xì)胞,如CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等,觀察這些免疫細(xì)胞在移植腎中的浸潤(rùn)情況。如果發(fā)現(xiàn)CD8+T細(xì)胞大量浸潤(rùn),可能提示細(xì)胞性免疫排斥反應(yīng)正在發(fā)生。此外,還可以標(biāo)記與腎組織修復(fù)相關(guān)的分子,如上皮生長(zhǎng)因子(EGF),了解移植腎在應(yīng)對(duì)排斥反應(yīng)和自我修復(fù)過(guò)程中的機(jī)制。在腎臟纖維化的研究方面,多重免疫組化能夠標(biāo)記腎間質(zhì)中的成纖維細(xì)胞標(biāo)志物,如α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA),同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞外基質(zhì)成分,如膠原蛋白I和膠原蛋白III。通過(guò)觀察這些標(biāo)志物在腎臟纖維化過(guò)程中的變化,包括成纖維細(xì)胞的活化、增殖以及細(xì)胞外基質(zhì)的合成和沉積情況,可以深入研究腎臟纖維化的發(fā)病機(jī)制,為開(kāi)發(fā)抗腎臟纖維化的藥物提供靶點(diǎn)。免疫細(xì)胞研究產(chǎn)品適用于細(xì)胞核斑點(diǎn)研究。SERPINF1免疫熒光染色
借助免疫組化,可深入剖析細(xì)胞分化過(guò)程,促進(jìn)醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究。collagenX(COL-10)免疫
在病毒***的研究中,這兩種技術(shù)有助于深入了解病毒與宿主細(xì)胞的相互作用。例如,在研究流感病毒***時(shí),我們可以用一種顏色的熒光標(biāo)記流感病毒的**白(NP),以確定病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的定位;用另一種顏色標(biāo)記宿主細(xì)胞的受體分子,如唾液酸受體,觀察病毒是如何識(shí)別并結(jié)合受體進(jìn)入細(xì)胞的;再用第三種顏色標(biāo)記宿主細(xì)胞內(nèi)與抗病毒免疫相關(guān)的蛋白,如干擾素誘導(dǎo)蛋白。這樣,通過(guò)多色免疫熒光,我們可以在一個(gè)視野下***地看到病毒入侵的整個(gè)過(guò)程,包括病毒進(jìn)入細(xì)胞的位點(diǎn)、在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制位置以及宿主細(xì)胞的免疫反應(yīng)啟動(dòng)情況。在細(xì)菌***方面,多重免疫熒光也發(fā)揮著重要作用。以結(jié)核桿菌***為例,我們可以用不同顏色的熒光分別標(biāo)記結(jié)核桿菌本身、被***的巨噬細(xì)胞內(nèi)的溶酶體以及與炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子。通過(guò)這種方式,能夠觀察到結(jié)核桿菌在巨噬細(xì)胞內(nèi)的存活狀態(tài),是被溶酶體包裹還是逃逸了溶酶體的殺傷,同時(shí)也能看到***過(guò)程中巨噬細(xì)胞周圍炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度和范圍,這對(duì)于深入研究結(jié)核桿菌的致病機(jī)制以及開(kāi)發(fā)新的***策略具有重要價(jià)值。collagenX(COL-10)免疫