肝臟是人體“的”代謝,與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關。肝細胞在肝臟參與的各種代謝過程中發(fā)揮了主要作用。肝細胞是實質細胞,在肝臟中的比例多;此外實質細胞還包括少量的膽管內皮細胞。而非實質細胞則包括星狀細胞,巨噬細胞,NK細胞,成纖維細胞等,只占整個肝臟細胞...
雖然各種組織培養(yǎng)要滿足不同的條件,但有許多因素是大多數(shù)原代培養(yǎng)共同需要的:(1)在取材時需去除脂肪和壞死的組織。(2)為減小對組織的損傷,需用鋒利的器具。(3)適度離心以去除用于解離的酶。(4)由于原代培養(yǎng)組織細胞的存活率很低,故用于原代培養(yǎng)的細胞的密度應高于...
幾十年來,人們一直在研究染色體分離,而通過對單個細胞的觀測先前的研究者認為離體細胞和組織內的細胞均會以相同的方式進行染色體分離。然而,在以前的工作中,Knouse發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)皿中生長的細胞出現(xiàn)染色體非整倍性分離的概率遠高于在其天然組織中的細胞。這促使...
生長因子是指具有刺激細胞生長活性的細胞因子,生長因子能調節(jié)細胞的各類活動與功能。生長因子通常充當細胞間的信號分子。生長因子有三種類型,T細胞生長因子,EGF表皮細胞生長因子,成纖維細胞生長因子。細胞生長因子的作用是一種多功能強力細胞因子,對促進成纖維細胞的...
為了彌補這一不足,機體在發(fā)育過程中還保留了一部分未分化的原始細胞,也就是干細胞。一旦生理需要,這些干細胞可以按照發(fā)育途徑通過分裂產(chǎn)生分化細胞。需要多種類型的細胞來修復時,則需要促活多潛能干細胞來修復受傷的組織。多向分化潛能和自我更新是干細胞的基本特點。具體來講...
培養(yǎng)液的配置方法大致相同,如下:1.取一袋干粉培養(yǎng)基,將干粉培養(yǎng)基溶于欲配制液體總量2/3的三蒸水,沖洗包裝袋2次倒入培養(yǎng)液中,加入磁性攪拌棒并置于磁力攪拌器上充分攪拌,確保培養(yǎng)基干粉充分溶解。2.按照產(chǎn)品說明的要求和實驗需要補加NaHCO3。3.調整培養(yǎng)...
原代細胞體外培養(yǎng)現(xiàn)狀:原代細胞自然生長有兩種方式,錨定依賴或非錨定依賴,這主要取決于它們在體內的組織來源:外周血(非錨定依賴)或固體組織部位(錨定依賴)。原代細胞一旦分離后,24-48h內需要進行貼壁或起始,開始培養(yǎng)。廣義地說,所有的哺乳動物細胞,...
1960年代無血清培養(yǎng)基開發(fā)可以分為兩個研究方向推進:一條路線是尋找能替代血清支持細胞在體外擴增的營養(yǎng)成分。血清含有上千種不同成分,為細胞體外培養(yǎng)提供普遍而豐富的營養(yǎng)和各種細胞因子,但動物血清的使用存在引進外源病毒的風險,因此減少血清濃度甚至完全去除血清對細胞...
兩種方法都需要培養(yǎng)數(shù)天,并且需要不斷觀察,找出只有單個細胞增殖的,且100%發(fā)熒光的細胞孔。做好標記,定期換液(含有嘌呤霉素)。待細胞長滿后進行檢測,篩選出高表達或干擾效率高的細胞株,然后進行擴大培養(yǎng)凍存或者進行后續(xù)實驗。注意:由于第一種方法細胞接種量少,所以...
血清凍融問題?1.血清凍融說明?●將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱12-24小時左右使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻?!袂形饘倓倧?20℃冰箱里拿出來的血清直接放在水浴中,無論室溫的水或者37℃的水,因為在...
PH計的溫度補償應考慮到溫度對電極系統(tǒng)的影響:在一些稀釋液和培養(yǎng)基中,PH隨溫度的變化而有相當大的變化。對于液體培養(yǎng)基和稀釋液而言,PH通常既可以在25℃下,也可以在其使用時的溫度下調整和測定。瓊脂培養(yǎng)基必須在溶解后進行PH的調整,溶解的溫度在45℃以上:...
單克隆細胞株的篩選:如何獲得高表達或者干擾效率高的單克隆細胞株,是很多科研工作者比較頭疼的事情,往往單克隆細胞株的過表達或干擾效率比混合克隆差。在這里,作者想說混合克隆和單克隆各有優(yōu)缺點。混合克隆制備周期短,過表達和干擾效果往往也很好,但隨著傳代次數(shù)的增加,過...
諾和諾德前首席執(zhí)行官在職時LarsRebienSorensen曾預測,諾和諾德的干細胞療法有望在5年內在臨床上治I型糖尿病。展望:根據(jù)國際市場調研機構TransparencyMarketResearch的報告,至2025年全球干細胞市場預計將達到2705億美元...
注意事項1.取材要求新鮮,無菌,解剖小鼠時,注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器,尤其是腸道等,防止污染脾臟。2.沖洗脾臟時要盡量洗凈血污,去除無用組織,并要防止組織干燥。3.碾磨后及時用清水沖洗篩網(wǎng),防止組織、細胞阻塞網(wǎng)孔。4.計數(shù)前,注意吸盡平皿里的...
什么是細胞株?細胞株是細胞在初次危機(第十代時)之后活下來的傳到第40到50代仍具有原代細胞染色體的二陪體的數(shù)量和接觸抑制功能的細胞。原代培養(yǎng)物經(jīng)初次傳代成功后即為細胞系(cell line), 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳...
LB培養(yǎng)基是一種應用普遍和普通的細菌基礎培養(yǎng)基,有時又稱普通培養(yǎng)基,含有酵母提取物、胰化蛋白胨和NaCl。酵母提取物:酵母經(jīng)破壁后將其中蛋白質、核酸、維生素等抽提,再經(jīng)生物酶解的富含小分子的氨基酸、肽、核苷酸、維生素等天然活性成分的淡黃色粉末,其中...
實驗室常用細胞株:Clone 9 CRL-1439 大鼠 肝臟 上皮細胞、貼壁 F-12K, 10%FBS;Clone M-3 CCL-53.1 小鼠 黑素瘤 上皮細胞、貼壁 F-12, 15% HS和2.5% FBS;COS-1 CRL-1650 猴 腎 成...
原代培養(yǎng)物經(jīng)初次傳代成功后即為細胞系(cell line), 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限, 可稱為有限細胞系(finite cell line), 如可以連續(xù)培養(yǎng), 則稱為連續(xù)細胞系(continuous cel...
我們的無分化誘導劑的軟骨分化培養(yǎng)基已經(jīng)被專門開發(fā)并優(yōu)化用于體外間充質干細胞軟骨形成的研究。間充質干細胞軟骨分化培養(yǎng)基(MCDM)是一種無菌液體培養(yǎng)基,含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激su、生長因子和微量礦物質。培養(yǎng)基為HEPES和碳酸氫鹽...
單克隆細胞株的篩選:如何獲得高表達或者干擾效率高的單克隆細胞株,是很多科研工作者比較頭疼的事情,往往單克隆細胞株的過表達或干擾效率比混合克隆差。在這里,作者想說混合克隆和單克隆各有優(yōu)缺點?;旌峡寺≈苽渲芷诙?,過表達和干擾效果往往也很好,但隨著傳代次數(shù)的增加,過...
神經(jīng)生長因子(nervegrowthfactor,NGF)在20世紀50年代被發(fā)現(xiàn),Levi—Montgalcini和Cohen證明了它重要的生物活性因子,是外周神經(jīng)系統(tǒng)和腦細胞的生長、發(fā)育和生存所必需的一種蛋白質。自NGF被發(fā)現(xiàn)以來,經(jīng)過眾多的科...
所以如果想獲得效果好的單克隆細胞株,建議是增加篩選的總量。很多研究者正是因為篩選總量不夠,或者的單克隆細胞株數(shù)量有限,也就導致了很難篩到效果好的細胞株。常規(guī)的篩選單克隆細胞株有兩種方法,原理是一樣的,操作上有些區(qū)別。1.有限稀釋法:將鑒定正確的混合克隆細胞株進...
慢病毒染上目的細胞:通過上述實驗確定了慢病毒染上目的細胞的比較好MOI,接下來就可以進行穩(wěn)定細胞株的篩選工作了。將目的細胞接種24孔板,控制好細胞密度,貼壁后大約為30%-40%左右的密度;細胞過夜培養(yǎng)后,按比較好MOI加入病毒,同時加入終濃度為8μg/mlp...
常見細胞株:104C1轉化的豚鼠胎體細胞;143TK人胸腺激酶缺陷性細胞系;1590人乳腺細胞系;16HBE人支氣管上皮細胞;208F大鼠成纖維細胞;22RV1人前列腺細胞;293人胚腎細胞;293A人胚腎細胞系;293AV人胚腎細胞-用于腺病毒包裝;A278...
肺泡上皮細胞培養(yǎng)基:上皮細胞培養(yǎng)基是專門為正常人類肺泡上皮細胞體外培養(yǎng)設計的適于其生長的培養(yǎng)基。是經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基,包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機和無機化合物、、生長因子、微量礦物質和低濃度胎牛血清(2%)。該培養(yǎng)基緩沖體系為重碳酸鹽,在含...
黑色素細胞培養(yǎng)基是經(jīng)滅菌的液體培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基質可加快刺激黑素細胞增殖、分化及黑素形成。包含必需和非必需氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激su、生長因子、微量礦物質和低濃度胎牛血清(0.5%)。該培養(yǎng)基緩沖體系為重碳酸鹽,在含5%CO2的細胞培養(yǎng)箱中平衡后p...
原代培養(yǎng)物經(jīng)初次傳代成功即稱為細胞系(CellLine),因此細胞系可泛指一般可能傳代的細胞。其中能夠連續(xù)傳代的細胞叫做連續(xù)細胞系或無限細胞系,不能連續(xù)培養(yǎng)的稱為有限細胞系。大多數(shù)二倍體細胞為有限細胞系。通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊...
什么是基本培養(yǎng)基?基本培養(yǎng)基是只能滿足微生物野生型菌株生長需要的培養(yǎng)基,有時用符號“[-]”來表示。野生型菌株是指從自然界分離得到的微生物在其發(fā)生突變前的原始菌株。什么是完全培養(yǎng)基?完全培養(yǎng)基是一種在基本培養(yǎng)基內加入一些富含氨基酸、維生素和堿基之類...
傳代培養(yǎng)的細胞是細胞系;細胞株就是從細胞系篩選出來的有特殊屬性的比如無線增值的。細胞株(CellStrain):通過選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的培養(yǎng)物稱為細胞株(CellStrain),也就是說,細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或...
放線菌培養(yǎng)基淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基(高氏一號培養(yǎng)基)可溶性淀粉2.0g硝酸鉀0.1g磷酸氫二鉀0.05g氯化鈉0.05g硫酸鎂0.05g硫酸亞鐵0.001g瓊脂2g水100ml先把淀粉放在燒杯里,用5毫升水調成糊狀后,倒入95毫升水,攪勻后加入其他藥品,使它溶解...