PCR試劑盒里到底有什么？首先試劑盒里要有說明書，國產(chǎn)用中文，進(jìn)口用外文，非英文要搭配個(gè)英文的，很少有翻譯中文的。說明書內(nèi)容很多，較重要的是告訴你不同的來源的核酸樣本怎么匹配試劑，以及程序怎么設(shè)定。一般pcr反應(yīng)包含這么幾個(gè)部分：模板（就是核酸樣本），引物，緩...

對于外泌體的標(biāo)記和鑒定，獲得外泌體之后，如何對其進(jìn)行鑒定又是一個(gè)困擾研究者的問題。國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(huì)(ISEV)在2014年提議，對于分離獲得的外泌體需要從三個(gè)層面進(jìn)行鑒定：WB檢測外泌體標(biāo)志蛋白表達(dá)情況：外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)目缒さ鞍准易?CD63/...

DNA檢測試劑盒操作步驟：1、加入130μLPrecipitant和950μL冷乙醇,混勻，置—20℃,1小時(shí)以上或過夜；2、4℃，12，000-14，000rpm離心15-30min，小心地棄去上清，收集沉淀的DNA；3、加入0.5mL70%的冷乙醇，洗DN...

RNA提取：1.凍存細(xì)胞與新鮮細(xì)胞的RNA提取有區(qū)別嗎？具體該怎么操作？新鮮細(xì)胞與凍存細(xì)胞RNA提取沒什么區(qū)別。千萬不能等細(xì)胞溶解了存狀態(tài)把Trizol直接加到凍存管了，一起化開，振蕩振蕩就可以了。與從組織中提RNA差不多。2.RNA得率低:該組織或者細(xì)胞中R...

DNA試劑盒使用注意事項(xiàng)：保存試劑：DNA試劑盒中的試劑和材料需要保存在適當(dāng)?shù)臏囟认隆＠缒承┰噭┬枰４嬖诘蜏叵?，避免受到光照、高溫等影響。注意質(zhì)控：在使用DNA試劑盒的過程中，需要進(jìn)行質(zhì)控。質(zhì)控的目的是確保提取和純化所得的DNA質(zhì)量合格。例如可以進(jìn)行PCR...

DNA提取主要是CTAB方法，其他的方法還有物理方式如玻璃珠法、超聲波法、研磨法、凍融法?；瘜W(xué)方式如異硫氰酸胍法、堿裂解法。生物方式：酶法。根據(jù)核酸分離純化方式的不同有硅質(zhì)材料、陰離子交換樹脂等。DNA提取的主要分類：真核生物DNA、細(xì)菌DNA、病毒DNA、質(zhì)...

RT-PCR就是逆轉(zhuǎn)錄PCR或稱為反轉(zhuǎn)錄PCR（Reversetranscription-PCR，RT-PCR），是以RNA為材料應(yīng)用于PCR擴(kuò)增中的一種實(shí)驗(yàn)方法。首先通過逆轉(zhuǎn)錄酶將總RNA或信使RNA（mRNA）轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA）。其次TaqDNA...

RNA逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：去除基因組DNA污染：殘留的基因組DNA(gDNA)會(huì)對熒光定量結(jié)果造成很大的干擾，為了使結(jié)果更加的真實(shí)、可重復(fù)，我們需要去除gDNA干擾。我們可以在引物設(shè)計(jì)時(shí)避免gDNA的擴(kuò)增，比如將上下游引物分別設(shè)在不同的外顯子上；或者在提取RN...

探針法qPCR試劑盒使用方法：數(shù)據(jù)處理：1、如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值，再推算出其濃度。2、如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或...

DNA提取方法：一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎細(xì)胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯萃取，高速離心后取上清，所得DNA大小為100-150kb二.甲酰胺解聚法：破碎細(xì)胞同上，然后用高濃度甲酰胺解聚蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合，再透析獲得DNA可得DNA200kb左右。...

什么是RNA提??？RNA提取是指從樣品中純化RNA的過程。RNA提取的常規(guī)方法稱為硫氰酸胍-苯酚-氯仿提取。Guanidiniumthiocyanate使蛋白質(zhì)變性。此外，它破壞水分子的氫鍵并用作離液劑。RNA提取中使用一種特殊試劑，稱為三試劑。它含有硫氰酸胍...

DNA提取的幾種方法介紹，DNA提取的成功與否取決于樣品的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)技術(shù)的熟練程度。苯酚抽提法：苯酚作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時(shí)，由于蛋白與DNA聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團(tuán)與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，...

當(dāng)外泌體在1983年頭次被發(fā)現(xiàn)后，其被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷...

外泌體試劑盒原理：傳統(tǒng)的外泌體研究，基本都是用WB之類來檢測和表征外泌體，比如用SDS-PAGE電泳可分析Exosome中蛋白的大致含量及種類（通過條帶的位置和條帶的粗細(xì)）；Western-Blot可以檢測Exosome中某特定蛋白的表達(dá)情況，就跟我們檢測其他...

逆轉(zhuǎn)錄酶是存在于RNA病毒體內(nèi)的依賴RNA的DNA聚合酶。RT-PCR實(shí)驗(yàn)中的逆轉(zhuǎn)錄酶需要具有以下二種活性：依賴RNA的DNA聚合酶活性：以RNA為模板合成cDNA的首先條鏈。依賴DNA的DNA聚合酶活性：以一條DNA鏈為模板合成互補(bǔ)的雙鏈DNA。在選擇逆轉(zhuǎn)錄...

逆轉(zhuǎn)錄是指以RNA為模板合成與其互補(bǔ)的cDNA的過程。逆轉(zhuǎn)錄PCR是將RNA的逆轉(zhuǎn)錄(reversetranscription)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)相結(jié)合的技術(shù)，故逆轉(zhuǎn)錄稱為RT-PCR或反轉(zhuǎn)錄PCR。逆轉(zhuǎn)錄PCR實(shí)驗(yàn)原理是，提取組織或細(xì)胞中的...

分離外泌體的方法之超速離心：離心是一種利用不同的離心力根據(jù)顆粒成分的密度、大小和形狀沉淀顆粒成分的過程。超速離心是一種離心過程，較多使用6×106g離心力，有助于隔離更小的組件，例如，核糖體、蛋白質(zhì)、病毒、外泌體和其他EV。加速度（g）、旋轉(zhuǎn)半徑、樣品粘度和沉...

生物試劑Tetraspanins是常見的外泌體標(biāo)志物。它們包括CD9、CD63和CD81膜蛋白。Tetraspanins參與外泌體的產(chǎn)生。在抗原呈遞細(xì)胞中，MHC-II分子的功能通過它們整合到富含四跨膜蛋白CD9的細(xì)胞質(zhì)膜區(qū)域中來調(diào)節(jié)。CD63外泌體蛋白被認(rèn)為...

DNA檢測試劑盒操作步驟：1、離心收集105~106細(xì)胞（1500×g，5min）于1.5mL微量離心管中；2、用PBS洗滌細(xì)胞二次（離心1500×g，5min），棄上清；3、沉淀的細(xì)胞中加入100μLLysisBuffer，渦旋振蕩器上劇烈混合10秒，離心1...

microRNA提取方法及步驟：室溫放置5分鐘以充分分離核酸蛋白復(fù)合物。加入200μl氯仿，劇烈振蕩15秒。室溫放置2-3分鐘，13，000rpm離心10分鐘。小心取上清（約600μl）轉(zhuǎn)入到新的離心管，加入1.5倍體積的無水乙醇（必須是室溫的，通常900μl...

逆轉(zhuǎn)錄試劑在許多生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中都有普遍的應(yīng)用。例如，在病毒學(xué)研究中，逆轉(zhuǎn)錄試劑可以被用來檢測病毒RNA的存在和濃度。此外，在基因表達(dá)和基因調(diào)控的研究中，逆轉(zhuǎn)錄試劑也可以用來研究mRNA的表達(dá)模式和在細(xì)胞內(nèi)的分布狀態(tài)。雖然逆轉(zhuǎn)錄試劑在研究中發(fā)揮著重要的作用，...

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)步驟：引物濃度計(jì)算方法：（新合成的引物的稀釋）假如終濃度為XuM（pmol/ul）加DEPC水體積（ul）=（OD×33×1000000）/（分子量×X）。用AMV逆轉(zhuǎn)錄酶進(jìn)行RT（10ul體積）1、準(zhǔn)備0.65mlEP管。2、加入4.5ulDEPC...

miRNA加尾法及其逆轉(zhuǎn)錄是近年來普遍用于miRNA研究的一種技術(shù)。它可以幫助我們深入理解miRNA的調(diào)控機(jī)制，它質(zhì)量得到改進(jìn)，效率也得到提高從而為miRNA研究提供了非常重要的資源。未來,miRNA加尾法及其逆轉(zhuǎn)錄一定會(huì)成為miRNA研究的重要部分，為miR...

逆轉(zhuǎn)錄酶是存在于RNA病毒體內(nèi)的依賴RNA的DNA聚合酶。RT-PCR實(shí)驗(yàn)中的逆轉(zhuǎn)錄酶需要具有以下二種活性：依賴RNA的DNA聚合酶活性：以RNA為模板合成cDNA的首先條鏈。依賴DNA的DNA聚合酶活性：以一條DNA鏈為模板合成互補(bǔ)的雙鏈DNA。在選擇逆轉(zhuǎn)錄...

各類型試劑盒的原理：首先是免疫比濁試劑。免疫比濁的原理與免疫試劑相同，是通過抗原-抗體的特異性反應(yīng)來進(jìn)行檢測。只不過免疫比濁試劑中沒有指示試劑來表征反應(yīng)結(jié)果，而是通過宏觀上的反應(yīng)復(fù)合物微粒（或沉淀）形成后造成體系濁度（吸光度）的變化來進(jìn)行檢測。使用光線通過反應(yīng)...

目前新型的冠狀病毒所用的核酸檢測試劑盒，則是利用了PCR的原理，簡單來說就是通過DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)來進(jìn)行檢測，因?yàn)镈NA雙螺旋結(jié)構(gòu)是堿基互補(bǔ)配對的，也就是說我們可以在體外通過病毒的核酸序列做出一條互補(bǔ)鏈，然后用這個(gè)互補(bǔ)鏈做成試劑盒，如果你的體液里面還有這種...

RNA提取中常見的問題：OD260/OD280比值偏低：蛋白質(zhì)污染：確保不要吸入中間層及有機(jī)相。減少起始樣品量，確保裂解完全、徹底。加入氯仿后首先要充分混勻，并且離心分層的離心力和時(shí)間要足夠。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，則用氯仿重新抽提一次...

DNA提取鑒定方法：分光光度法：在260nm和280nm處測定DNA溶液的光吸收，A260與A280之比應(yīng)在1.75-1.80之間。低于此值表明制備物中殘留蛋白質(zhì)成分較高或含有酚，高于此值表明有RNA的殘留。凝膠電泳分析：影響瓊脂糖凝膠電泳DNA遷移率的因素：...

DNA提取的基本步驟：1.細(xì)胞裂解與細(xì)胞裂解緩沖液裂解細(xì)胞膜；2.脂質(zhì)被洗滌劑和表面活性劑分解；3.通過添加蛋白酶消化蛋白質(zhì)；4.通過添加RNase消化RNA；5.通過加入濃鹽然后離心分離細(xì)胞碎片、消化蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNA；6.用冰冷的乙醇或異丙醇乙醇沉淀DN...

過柱法DNA提取的優(yōu)勢：離心柱法DNA提取它的優(yōu)點(diǎn)是比傳統(tǒng)的酚氯法提取的純度高，有利于RNA保護(hù)，而且能進(jìn)行微量操作，以其低廉的價(jià)格和相對便捷的操作，漸逐取代了傳統(tǒng)DNA提取方法，被高校科研所等市場普遍接受。離心柱法DNA提取的缺點(diǎn)是需要較多的樣本，耗材多，對...