基因?qū)嶒?yàn)室與PCR實(shí)驗(yàn)室的規(guī)劃布局要求:1、環(huán)境要求通風(fēng)、溫度和濕度實(shí)驗(yàn)室的長期使用,有毒、有害等污濁氣體不及時排出會危害室內(nèi)操作人員健康。實(shí)驗(yàn)室良好的通風(fēng)環(huán)境是必要前提。除了實(shí)驗(yàn)室建筑選址的朝向和所處地域的氣候特征,實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)系統(tǒng)也是必須考慮的問題。通風(fēng)柜作為保持實(shí)驗(yàn)室內(nèi)安全、衛(wèi)生的重要柜體,是建立一個科學(xué)實(shí)驗(yàn)室必不可少的組成部分。潔凈度實(shí)驗(yàn)室的潔凈,除了實(shí)驗(yàn)室地面、實(shí)驗(yàn)室器具的清潔,還要考慮實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣的潔凈度。不良的空氣質(zhì)量會影響實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行,擴(kuò)散到空氣中的有害物質(zhì)也會危害到人體健康。2、設(shè)施要求給排水、排污系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室,都會配置有供水、排水和排污系統(tǒng),實(shí)驗(yàn)臺配置水池、滴水架、排水槽,通風(fēng)柜與通風(fēng)柜管道聯(lián)通。3、實(shí)驗(yàn)室工作人員要求PCR實(shí)驗(yàn)室內(nèi)工作人員必須參加由國家衛(wèi)生部或各省臨床檢驗(yàn)中心舉辦的臨床基因擴(kuò)增培訓(xùn)班,并持證上崗。PCR實(shí)驗(yàn)室通過驗(yàn)收,實(shí)驗(yàn)室至少必須應(yīng)有兩個以上持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR實(shí)驗(yàn)室必須建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理制度、建立標(biāo)準(zhǔn)化操作程序(SOP)、建立系列質(zhì)量管理文件等,確保實(shí)驗(yàn)室日常運(yùn)行符合國家衛(wèi)生部的要求,確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確、確保實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生安全。熒光定量PCR因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。實(shí)時定量PCR儀銷售電話
普通PCR儀:一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個特定退火溫度的PCR儀稱作傳統(tǒng)PCR儀,也叫普通PCR儀。如果要做不同的退火溫度需要多次運(yùn)行。主要是用于簡單的、對目的基因退火溫度的擴(kuò)增。該儀器主要應(yīng)用于科學(xué)研究、教學(xué)、醫(yī)學(xué)臨床、檢驗(yàn)檢疫等機(jī)構(gòu)。
梯度PCR儀:一次性PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度,通常有12種溫度梯度)的PCR儀稱作梯度PCR儀。因?yàn)楸粩U(kuò)增的不同DN段,其適退火溫度是不同的,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增,就可以篩選出表達(dá)量高的適退火溫度,進(jìn)行有效的擴(kuò)增。用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間。梯度PCR儀在不設(shè)置梯度的情況下也可以做普通PCR擴(kuò)增。主要應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu)。梯度PCR儀主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣既節(jié)約時間,也節(jié)約成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機(jī)構(gòu),檢驗(yàn)、檢疫等。 實(shí)驗(yàn)室PCR儀銷售價格PCR在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)中的應(yīng)用領(lǐng)域就是對傳染性疾病的診斷。
移動箱式PCR實(shí)驗(yàn)室,是對集裝箱的增值利用。特點(diǎn)是轉(zhuǎn)運(yùn)靈活,非常堅固,可以承受較大的壓力。移動箱式PCR實(shí)驗(yàn)室可在工廠基本完成安裝,通過汽車將成品運(yùn)輸?shù)浆F(xiàn)場,直接吊裝到位,接駁水電即可滿足應(yīng)急檢驗(yàn)的需求,十分方便。移動箱式PCR可以多次重復(fù)利用,拆裝方便,性能優(yōu)越,穩(wěn)定牢固,防震性能好,成本相對來說較低,也十分安全,響應(yīng)國家提倡“綠色環(huán)保、低碳節(jié)能”的理念。由一個標(biāo)準(zhǔn)集裝箱組成的移動箱式PCR實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)的流程包括里面的設(shè)備均按照標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室來建設(shè),并根據(jù)《醫(yī)學(xué)生物安全二級實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》T/CECS662G-2020中的要求配備洗消間。存放占地面積大概,任何一個醫(yī)院或者發(fā)生地都會有如此小的空間。應(yīng)急時可作為車載實(shí)驗(yàn)室使用,運(yùn)到發(fā)生地時不需要任何安裝即可使用。
PCR儀的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:1、模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;2、模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對結(jié)合;3、引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復(fù)制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈",而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍(Plateau)。到達(dá)平臺期所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。在此同時認(rèn)識到蛋白質(zhì)是接受RNA的遺傳信息而合成的。50年代Zamecnik等在形態(tài)學(xué)和分離的亞細(xì)胞組分實(shí)驗(yàn)中已發(fā)現(xiàn)微粒體(microsome)是細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成的部位。 PCR(聚合酶鏈反應(yīng))是一種體外核酸擴(kuò)增技術(shù),又稱為無細(xì)胞分子克隆法.
基因擴(kuò)增儀因操作方便、運(yùn)行速度快、實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。面對各種不同性能的基因擴(kuò)增儀,又該如何選擇呢?基因擴(kuò)增儀的選購誤區(qū)誤區(qū)一:儀器通道越多越好隨著基因擴(kuò)增技術(shù)的成熟運(yùn)用,多重擴(kuò)增越來越熱鬧,基因擴(kuò)增儀也不能幸免。從單通道基因擴(kuò)增儀發(fā)展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道基因擴(kuò)增儀,眼花繚亂的選擇讓人無所適從,就有人一不小心走進(jìn)了“通道越多越好”的誤區(qū)。在使用有些廠家5通道的基因擴(kuò)增儀時,為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性和準(zhǔn)確性都要在實(shí)驗(yàn)中使用ROX或Referencedye,這些熒光染料都必須單獨(dú)使用一個檢測通道。這樣以來,真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個,而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本??紤]多重基因擴(kuò)增儀的通道數(shù)的時候也應(yīng)該從實(shí)驗(yàn)室實(shí)際情況出發(fā),多重基因擴(kuò)增儀并非人人適用、人人可用,因?yàn)樗箤?shí)驗(yàn)復(fù)雜化了。誤區(qū)二:基因擴(kuò)增儀無需梯度功能對于使用染料法的定量PCR反應(yīng),雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計軟件或者經(jīng)驗(yàn)公式計算熔解溫度(Tm值),但運(yùn)用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差異會很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變?nèi)f化,對于特殊片斷。 PCR技術(shù)起初的臨床應(yīng)用就是從檢測鐮狀細(xì)胞和β-地中海貧血的基因突變開始的。上海力康核酸定量PCR儀近期價格
PCR的三個反應(yīng)(變性-退火-延伸)0步驟反復(fù)進(jìn)行,使DNA擴(kuò)增量呈指數(shù)上升。實(shí)時定量PCR儀銷售電話
PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室。PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于放大特定的DN段,可看作生物體外的特殊DNA復(fù)制。其特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,PCR實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域,PCR實(shí)驗(yàn)室主要實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目:檢測,乙型肝炎,禽疫病,基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等。pcr實(shí)驗(yàn)室設(shè)計建設(shè)中容易出現(xiàn)的問題:1、PCR實(shí)驗(yàn)室的空氣流向必須嚴(yán)格按照試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)空氣壓力逐漸遞減方式進(jìn)行,防止擴(kuò)增產(chǎn)物順空氣氣流進(jìn)入擴(kuò)增前的區(qū)域。需要嚴(yán)格的通風(fēng)設(shè)計,若通風(fēng)設(shè)計不合理,會使風(fēng)速流向混亂,甚至危害人們健康。2、人流路徑與物流路徑設(shè)計不合理進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室區(qū)域工作人員應(yīng)該按照以下路徑:公共清潔區(qū)——更衣間(更換潔凈服)——緩沖間——污染實(shí)驗(yàn)區(qū)工作人員退出實(shí)驗(yàn)室的路徑為:污染試驗(yàn)區(qū)——緩沖間——淋浴間。 實(shí)時定量PCR儀銷售電話
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