蕪湖貴陽鼠尾膠原

鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用：膠原蛋白具有抗氧化作用，但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構(gòu)建，對于其抗氧化作用目前尚無相關(guān)研究。目的：探討鼠尾膠原對過氧化氫導(dǎo)致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法：將原代培養(yǎng)的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養(yǎng)皿（實驗組）和普通培養(yǎng)皿（對照組）中，并且均用0，10，100μmol/LH2O2誘導(dǎo)。24h后，以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態(tài)，應(yīng)用MTT比色法檢測心肌細胞存活率，TUNEL法檢測心肌細胞凋亡形態(tài)，流式細胞技術(shù)檢測心肌細胞凋亡率，黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力，硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平，Western-Blot檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達。I型膠原蛋白（Collagen, Type I）結(jié)構(gòu)上是由2個α1鏈和1個α2鏈組成的異源多聚體。蕪湖貴陽鼠尾膠原

鼠尾膠原實驗應(yīng)用：探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細胞膜片鉗實驗中的促進毛細胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原，觀察全細胞膜片鉗實驗中，自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。結(jié)果無鼠尾膠原時，前庭毛細胞懸浮于外液，不宜封接；有鼠尾膠原時，前庭毛細胞貼附于培養(yǎng)皿底壁，易于封接和長時間（約8h)的觀察和記錄。鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用。結(jié)論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。成都正規(guī)鼠尾膠原平均價格利用鼠尾Ⅰ型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項：通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養(yǎng)器皿，培養(yǎng)一些在普通細胞培養(yǎng)器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠，模擬真實的生長環(huán)境，使細胞在三維環(huán)境中生長。1，在使用鼠膠原蛋白型包被的細胞培養(yǎng)皿中檢查到PC-12細胞的貼壁和生長。1mg/ml濃度以上，pH左右時可形成具有一定強度的三維膠，檢查到NIH-3T3細胞在三維膠內(nèi)正常生長、PC-12細胞在三維膠表面正常生長。使用方法：1、細胞培養(yǎng)器皿的表面包被推薦濃度：1-5ug/cm0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中。

一種海貍鼠尾膠原手術(shù)縫合線制備方法，其特征在于，步驟如下：(1)膠原紡絲液的配制：將備用的海貍鼠尾筋切成薄片，用無花果蛋白酶進行酶解處理，再用雙氧水溶液殺酶；將殺酶后的切片用蒸餾水沖洗，然后用乙酸溶液溶脹，把溶脹后的切片分散攪拌，然后用濾網(wǎng)過濾，除去雜質(zhì)及不溶脹物，然后把該溶液離心脫泡制得膠原紡絲溶液；(2)手術(shù)縫合線纖維的成形：將膠原紡絲液裝入立式向上濕法紡絲機的紡絲液貯罐中，用氮氣擠壓入含有pH＝8-11、質(zhì)量濃度為50-80％的硫酸鈉溶液的立式凝固浴中凝固成型，再經(jīng)過質(zhì)量濃度為60-90％的乙醇水溶液的脫水浴脫水，再經(jīng)過假捻器加捻，合股后再進入含有pH＝9-11、質(zhì)量濃度為0.8-1.2％戊二醛的交聯(lián)浴中交聯(lián)，經(jīng)過水浴水洗，再經(jīng)第二次加捻，除去水及交聯(lián)劑，干燥后，在卷繞輥上卷繞即得手術(shù)縫合線。制備鼠尾膠原：重復(fù)步驟2、3，直至尾腱量夠用。

I型鼠尾膠原是借鑒NavneetaRajan,JasonHabermehl法，經(jīng)過乙酸抽提、離心、滅菌、透析等步驟制備得到的高純度、高活性膠原蛋白，屬于醫(yī)藥級別產(chǎn)品，可用于包被細胞培養(yǎng)器皿（單分子層包被），適合多種類型細胞的貼壁如肝臟細胞、神經(jīng)節(jié)細胞、胚胎細胞、肌細胞、肺細胞、神經(jīng)鞘細胞等。I型膠原蛋白包被細胞培養(yǎng)板，規(guī)格為6/24孔板，表面經(jīng)I型膠原蛋白包被，可以很好的降低蛋白質(zhì)的吸附。使用這種細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)細胞，可以獲得良好的細胞貼壁率，細胞增殖速度快，形態(tài)均一，細胞培養(yǎng)成功率高。鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進體外培養(yǎng)細胞（特別是上皮細胞）貼壁的作用。上海北京鼠尾膠原

鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用。蕪湖貴陽鼠尾膠原

生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝，保持恒低溫無菌的環(huán)境，利用同樣濃度的鹽溶液進行兩次鹽析與離心，簡化了提純步驟。所用酸為低濃度酸溶液，并采用檸檬酸替代醋酸進行提純。從提取原料到樣品生成過程中，進行多次真空冷凍干燥，并經(jīng)進一步處理獲得含水率在3％以下的膠原蛋白微粉；較后由滅菌、無菌包裝，成品膠原蛋白粉末的純度在98％以上。本發(fā)明獲得的膠原蛋白降低了蛋白的免疫原性，提高了產(chǎn)率和生物相容性，降低了成本，適用于生物醫(yī)用材料，所得到的膠原蛋白能完整地保留其特有的三股螺旋結(jié)構(gòu)。蕪湖貴陽鼠尾膠原