深圳草魚原代肝細胞貼壁

來源: 發(fā)布時間:2023-12-19

原代肝細胞可以用于乙肝病毒的對照試驗。為探究不同類型肝細胞對乙型肝炎病毒(HBV)的影響,以及不同藥物和生物學處理對HBV的影響,可以選擇了人原代肝細胞(PHH)樹鼩原代肝細胞(PTH)、hNTCP穩(wěn)定表達豬肝細胞(PPH-hNTCP)和hNTCP穩(wěn)定表達liver cancer細胞系(Huh7D-hNTCP)作為研究對象。 采用HBV模型,將不同類型肝細胞融合HBV,并進行藥物處理和生物學處理。藥物處理包括小分子化合物和中藥提取物等,生物學處理包括過表達、敲除siRNA和shRNA等。通過對處理后的細胞進行評價,可以了解不同藥物和生物學處理對HBV的影響。 這種研究方法的意義在于探究不同類型肝細胞對HBV的影響,為研究HBV的機制提供重要的實驗數(shù)據(jù)。同時,本研究還可以為開發(fā)新型抗HBV藥物提供參考,為臨床克服乙型肝炎提供新的思路和方法。立沃生物原代肝細胞可以用于肝臟疾病研究、藥物代謝和藥物毒性、篩選藥物和測試藥物的毒性等方面的研究。深圳草魚原代肝細胞貼壁

原代肝細胞還廣泛應用于構建移植人肝組織的小鼠模型。為了研究肝臟疾病的發(fā)病機制和開發(fā)新的解決方法,科學家們開發(fā)了小鼠模型來模擬人類肝臟疾病。其中,將人原代肝細胞移植于鼠可建立移植人肝組織的小鼠模型。這種模型可以用于研究肝炎、liver cancer、肝纖維化等肝臟疾病的發(fā)病機制和治療方法。 常用的小鼠模型為HBV三聚體小鼠模型。該模型首先對BALB/c鼠進行全身致命性照射以去除正常小鼠的免疫系統(tǒng),然后用SCID小鼠骨髓細胞進行免疫重構,然后將已經(jīng)受HBV影響的人原代肝細胞移植到鼠肝內(nèi)。大約80%的鼠出現(xiàn)病毒血癥,這意味著該模型可以用于研究HBV的發(fā)病機制和克服方法。 盡管血漿中病毒滴度比較低,維持時間大約20d,但短期觀察抗病毒的療效仍是可行的。這意味著該模型可以用于評估新的抗病毒藥物的療效和安全性。此外,該模型還可以用于研究liver cancer的發(fā)病機制和解決方法,因為liver cancer通常與肝炎病毒有關。 移植人肝組織的小鼠模型是一種重要的實驗工具,可以用于研究肝臟疾病的發(fā)病機制和解決方法,幫助科學家們更好地理解肝臟疾病,并開發(fā)新的克服途徑?;葜菰渭毎麑嶒炘渭毎荒軅鞔烷L期培養(yǎng),會丟失肝細胞分化特性與功能,通過誘導去分化做成肝祖細胞可以傳代培養(yǎng)。

解決人工肝臟合成難題,原代肝細胞是理想的肝細胞源。目前,常用的肝細胞源有人原代肝細胞、動物原代肝細胞、liver cancer細胞系HepG2、HepaRG、永生化細胞以及干細胞等。其中,人原代肝細胞是理想的肝細胞源,因為它們具有完整的肝功能和生理特性,能夠更好地模擬人體肝臟的生理狀態(tài)。但是,由于人原代肝細胞的獲取和保存非常困難,且存在批次差異和有限的增殖能力,因此在實際應用中受到了一定的限制。 相比之下,動物原代肝細胞則具有更好的增殖能力和更便捷的獲取方式,但是由于動物肝臟與人肝存在一定的差異,因此其在模擬人體肝臟生理狀態(tài)方面存在一定的局限性。HepG2和HepaRG則是常用的liver cancer細胞系,它們具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性,但是存在致瘤風險,因此在臨床應用中需要謹慎使用。 永生化細胞則是通過基因工程技術將原代肝細胞轉化為無限增殖的細胞系,如HepG2.2.15和Huh7等。這些細胞系具有較好的增殖能力和穩(wěn)定性,但是存在一定的局限性和風險。 綜上所述,原代肝細胞是理想的肝細胞源,選擇合適的肝細胞源需要綜合考慮其功能、增殖能力、安全性等因素,以期達到想要的生物人工肝效果。

不同物種的原代肝細胞在貼壁時間上存在差異。以小鼠為例,其原代肝細胞可能在培養(yǎng)基中需1個小時開始貼壁,而其他物種則需要4-6小時左右。這是由于不同物種的細胞形態(tài)、生理特性和培養(yǎng)條件等因素的影響。 在進行原代肝細胞培養(yǎng)時,貼壁時間是一個重要的指標。一般來說,原代肝細胞在培養(yǎng)基中貼壁后,細胞的代謝活性和功能會得到提高,因此貼壁時間越短,細胞的生物學活性就越高。但是,如果貼壁時間過短,細胞可能會出現(xiàn)脫落或死亡等情況,因此需要根據(jù)具體情況進行調整。 另外,原代肝細胞的貼壁能力也與細胞的新鮮程度有關。新鮮分離的原代肝細胞一般需要4-6小時才能貼壁,而經(jīng)過冷凍保存的細胞則需要更長的時間。因此,在進行原代肝細胞培養(yǎng)時,需要根據(jù)細胞的新鮮程度和貼壁時間進行合理的調整。 需要注意的是,幾乎所有物種的原代肝細胞都可以貼壁,但不同物種的細胞在培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基配方等方面存在差異。因此,在進行原代肝細胞培養(yǎng)時,需要根據(jù)具體物種和實驗要求進行合理的選擇和調整,以確保細胞的生物學活性和代謝功能得到有效的發(fā)揮。立沃生物的原代肝細胞配套有多種細胞培養(yǎng)試劑,包括細胞培養(yǎng)基、細胞因子等,為后續(xù)研究保駕護航。

原代肝細胞可以分為貼壁原代肝細胞和懸浮原代肝細胞兩種類型。貼壁原代肝細胞是指在培養(yǎng)皿中貼附在表面上的肝細胞,而懸浮原代肝細胞則是指在培養(yǎng)液中懸浮的肝細胞。 由于原代肝細胞的特殊性質,它們在冷凍復蘇后容易出現(xiàn)失巢凋亡的現(xiàn)象。因此,如果要將肝細胞用于懸浮培養(yǎng),一般只能存活6小時左右,適合用于短期研究。而貼壁原代肝細胞則可以存活培養(yǎng)達15天,適合長期實驗研究觀察。 貼壁原代肝細胞的培養(yǎng)需要一定的技術和條件。首先,需要選擇適合的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件,以保證肝細胞的正常生長和分化。其次,需要注意細胞的密度和培養(yǎng)皿的大小,以避免細胞過度生長或過度擁擠。此外,還需要注意細胞的純度和穩(wěn)定性,以保證實驗結果的準確性和可靠性。 原代肝細胞對于研究肝臟疾病和藥物代謝等方面具有重要的意義。通過對肝細胞的培養(yǎng)和研究,可以更好地理解肝臟的生理和病理過程,為肝臟疾病的診斷和預防提供更有效的方法和手段。立沃生物的原代肝細胞的分離技術門檻很高,需要特定的實驗室條件和技術,嚴格的實驗室管理和質量控制。北京比格犬原代肝細胞實驗

原代肝細胞作為體外藥物代謝研究的“金標準”,在藥物研發(fā)和毒理學研究中具有重要的意義。深圳草魚原代肝細胞貼壁

貼壁原代肝細胞是一種非常重要的實驗材料,常用于酶誘導實驗。在進行實驗前,需要對細胞進行復蘇處理,使其恢復到正常狀態(tài)。復蘇后,需要使用鋪板培養(yǎng)基進行懸浮,調整細胞濃度,然后使用膠原包被板進行培養(yǎng)。一般情況下,細胞可以在4~6小時內(nèi)貼壁。在原代肝細胞細胞貼壁后,需要更換維持培養(yǎng)基,繼續(xù)維持18小時,以保證細胞狀態(tài)能夠盡可能地恢復。一旦原代肝細胞細胞狀態(tài)恢復良好,就可以開始進行酶誘導實驗了。通過檢測代謝活性和mRNA誘導水平,可以了解原代肝細胞細胞的生理狀態(tài)和功能。整個周期來看,原代肝細胞細胞貼壁后可以維持6~7天的狀態(tài)。但是隨著時間的延長,細胞貼壁狀態(tài)會變差,細胞會出現(xiàn)脫落懸浮現(xiàn)象。因此,在進行實驗時,需要注意原代肝細胞細胞的狀態(tài)和質量,及時更換培養(yǎng)基,保持細胞的正常生長和功能。同時,也需要注意實驗條件的控制,避免對原代肝細胞細胞造成不良影響。通過科學合理的實驗設計和操作,可以獲得準確可靠的實驗結果,為研究原代肝細胞細胞生理和病理提供重要的實驗依據(jù)。深圳草魚原代肝細胞貼壁