基因探針,即核酸探針,是一段帶有檢測標(biāo)記,且順序已知的,與目的基因互補的核酸序列(DNA或RNA)?;蛱结樛ㄟ^分子雜交與目的基因結(jié)合,產(chǎn)生雜交信號,能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來。根據(jù)雜交原理,作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件:①應(yīng)是單鏈,若為雙鏈,必須先行變性處理。②應(yīng)帶有容易被檢測的標(biāo)記。它可以包括整個基因,也可以**是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之轉(zhuǎn)錄而來的RNA。DNA探針根據(jù)其來源有3種:一種來自基因組中有關(guān)的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe);另一種是從相應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄獲得了mRNA,再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe)。與基因組探針不同的是,cDNA探針不含有內(nèi)含子序列。此外,還可在體外人工合成堿基數(shù)不多的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。主要用來分析固體物質(zhì)表面的細小顆?;蛭⑿^(qū)域,小范圍直徑為1μm左右。楊浦區(qū)優(yōu)勢探針商家
禽流感基因探針制備探針濃度鑒定將禽流感病毒H9N2亞型毒株**白(NP)基因3′端較為保守的、約350bp的編碼序列通過限制性內(nèi)切酶Hae¸切割、分離后,用隨機引物法制備Digoxigenin2112dUTP標(biāo)記探針。測定該探針的濃度為100Lgöml。特異性試驗發(fā)現(xiàn)該探針只能與實驗室構(gòu)建的、含有NP基因的重組載體pGEM2TE2NP和pBacPAK2NP以及A型流感病毒H9N2亞型、H3N2亞型以及H9N3亞型毒株基因組RNA結(jié)合出現(xiàn)特異性的顏色反應(yīng),而與實驗室常用的載體pGEM2Teasy、pBacPAK2His3、pTARGET和pGEMEX22以及新城疫病毒、傳染***毒和傳染性喉氣管炎病毒基因組不發(fā)生反應(yīng)。應(yīng)用該探針檢測含NP基因的重組載體和重組病毒證明該探針是有效的,可用于含禽流感病毒樣品或材料的檢測。松江區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針按需定制探針卡應(yīng)用在IC尚未封裝前,針對裸晶系以探針做功能測試,篩選出不良品、再進行之后的封裝工程。
進行分子突變需要大量的探針拷貝,后者一般是通過分子克隆(molecular cloning)獲得的??寺∈侵赣脽o性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復(fù)制品。當(dāng)制備基因組DNA探針前,應(yīng)先制備基因組文庫,即把基因組DNA打斷,或用限制性酶作不完全水解,得到許多大小不等的隨機片段,將這些片段體外重組到運載體(噬菌體、質(zhì)粒等)中去,再將后者轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)乃拗骷毎绱竽c肝菌,這時在固體培養(yǎng)基上可以得到許多攜帶有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通過原位雜交,從中可篩出含有目的基因片段的克隆,然后通過細胞擴增,制備出大量的探針。
值得一提的是,通過改變外源基因的插入方向或選用不同的RNA聚合酶,可以控制RNA的轉(zhuǎn)錄方向,即以哪條DNA鏈以模板轉(zhuǎn)錄RNA。這種可以得到同義RNA探針(與mRNA同序列)和反義RNA探針(與mRNA互補),反義RNA又稱cRNA,除可用于反義核酸研究外,還可用于檢測mRNA的表達水平。在這種情況下,因為探針和靶序列均為單鏈,所以雜交的效率要比DNA-DNA雜交高幾個數(shù)量級。RNA探針除可用于檢測DNA和mRNA外,還有一個重要用途,在研究基因表達時,常常需要觀察該基因的轉(zhuǎn)錄狀況。電子探針的構(gòu)成除了與掃描電鏡結(jié)構(gòu)相似的主機系統(tǒng)以外,還主要包括分光系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)等部分。
這樣我們可以事先建立一系列θ角與相應(yīng)元素的對應(yīng)關(guān)系,當(dāng)某個由電子束激發(fā)的X特征射線照射到分光晶體上時,我們可在與入射方向交成2θ角的相應(yīng)方向上接收到該波長的X射線信號,同時也就測出了對應(yīng)的化學(xué)元素。只要令探測器連續(xù)進行2θ角的掃描,即可在整個元素范圍內(nèi)實現(xiàn)連續(xù)測量。由分光晶體所分散的單一波長X射線被X射線檢測器接受,常用的檢測器一般是正比計數(shù)器。當(dāng)某一X射線光子進入計數(shù)管后,管內(nèi)氣體電離,并在電場作用下產(chǎn)生電脈沖信號。X射線譜儀。測量各種元素產(chǎn)生的X射線波長和強度,并以此對微小體積中所含元素進行定性和定量分析。奉賢區(qū)品牌探針五星服務(wù)
近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯(lián)合裝置,可在觀察微區(qū)形貌的同時逐點分析試樣的化學(xué)成分及結(jié)構(gòu)。楊浦區(qū)優(yōu)勢探針商家
(1)電子光學(xué)系統(tǒng)。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm。被激發(fā)原子發(fā)射特征X射線譜過程如下:圍繞原子核運動的內(nèi)層電子,被電子束的電子轟擊后,其他外層電子為補充轟擊出的電子而發(fā)生躍遷,在躍遷過程中釋放出能量,即發(fā)射出X射線。(2)X射線譜儀。測量各種元素產(chǎn)生的X射線波長和強度,并以此對微小體積中所含元素進行定性和定量分析。特征X射線圖像顯像管的原理是:X射線束入射到一已知晶面間距的晶體上(X射線分光光度計的彎曲晶體上),經(jīng)衍射后各種波長的X射線按不同的布拉格角彼此分開,因此如轉(zhuǎn)動晶體,改變衍射角,同時以兩倍于晶體的轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)動計數(shù)器,就可以依次測量出各種元素所產(chǎn)生的X射線波長和強度,達到定性和定量分析的目的。楊浦區(qū)優(yōu)勢探針商家
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