南京E1B殘留DNA檢測(cè)

美國藥典（USP）對(duì)宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的規(guī)定：美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘余限度不得超過100pg/劑量，對(duì)于大劑量的如單克隆抗體的生物制品，根據(jù)其殘余DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/劑量?！睹绹幍洹?USP40－NF35)通則＜1130＞收錄了3種外源性DNA殘留量測(cè)定的方法，分別為DNA探針雜交法、閾值法和實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCＲ)法。

歐洲藥典（EP）對(duì)宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的規(guī)定：歐洲藥品管理局指出需要對(duì)連續(xù)傳代哺乳細(xì)胞殘留DNA的去除過程進(jìn)行工藝驗(yàn)證，旨在確認(rèn)去除殘留DNA的主要步驟，并確保此工藝程序可以將終產(chǎn)品中的殘留DNA控制在允許范圍［4］。《歐洲藥典》(EP9．3)通則規(guī)定的生物制品殘留DNA限度大多為不超過10ng/劑量，但對(duì)個(gè)別疫苗的殘留DNA限定標(biāo)準(zhǔn)更嚴(yán)格，如甲型肝炎滅活疫苗中的殘留DNA不得超過100pg/劑量，乙型肝炎疫苗中的DNA殘留量不得超過10pg/劑量。 為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)？南京E1B殘留DNA檢測(cè)

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)：用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①如出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象：反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機(jī)前確保管蓋密閉，反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān)，需咨詢硬件供應(yīng)商解決。②如出現(xiàn)擴(kuò)增曲線不平滑現(xiàn)象：可能與ROX加入量不足相關(guān)，個(gè)別設(shè)備有ROX校正功能，不同型號(hào)設(shè)備對(duì)ROX的需求量會(huì)有差異，需設(shè)置實(shí)驗(yàn)摸索合適的ROX加入量。鄭州正揚(yáng)生物HEK293細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒。

為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)?眾所周知，大部分生物制劑是不經(jīng)過胃腸道直接進(jìn)入體內(nèi)，所以除了生物活性外，相關(guān)部門對(duì)藥品中雜質(zhì)的含量要求非常嚴(yán)格。其中，宿主細(xì)胞殘留DNA因?yàn)榫哂刑貏e的潛在安全風(fēng)險(xiǎn)，一直是監(jiān)管機(jī)構(gòu)關(guān)注的重點(diǎn)。生物制品中的重組蛋白藥、抗體藥、疫苗等產(chǎn)品是用連續(xù)傳代的動(dòng)物細(xì)胞株表達(dá)生產(chǎn)，雖然經(jīng)過嚴(yán)格的純化工藝，但產(chǎn)品中仍有可能殘余宿主細(xì)胞DNA。這些殘余DNA可能帶來傳染性或致瘤性風(fēng)險(xiǎn)，比如殘留DNA可能攜帶HIV病毒或Ras  ai基因。

qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的原理：PCR反應(yīng)過程中可通過熒光標(biāo)記的特異性探針檢測(cè)PCR產(chǎn)物量。帶有一對(duì)熒光分子的探針與樣品中DNA通過堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，Taq聚合酶合成DNA，同時(shí)沿5’-3’方向水解DNA探針，一對(duì)熒光分子隨著探針的水解而分開，發(fā)出熒光信號(hào)。通過連續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)體系中熒光讀數(shù)的變化，可即時(shí)反映特異性擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化。在反應(yīng)過程中所釋放的熒光強(qiáng)度達(dá)到預(yù)設(shè)的閾值時(shí)，體系的PCR循環(huán)數(shù)(Ct值)與該體系所含的起始DNA模板量的對(duì)數(shù)值呈線性關(guān)系。采用已知濃度的DNA標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線，由此計(jì)算樣品中的DNA殘留量。用qPCR的方法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的試劑盒有哪些？

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測(cè)各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的Vero宿主細(xì)胞DNA，產(chǎn)品具備檢測(cè)快速、操作簡(jiǎn)單、特異性強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度高、穩(wěn)定性好、能防止PCR產(chǎn)物污染等特點(diǎn)。蕞低檢測(cè)限可以達(dá)到fg級(jí)別。試劑盒配套有VeroDNA定量參考品，已溯源至國家標(biāo)準(zhǔn)品。產(chǎn)品檢測(cè)方法可溯源至中國藥典方法，通則〈3407〉。宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的目的：①確認(rèn)純化工藝合理，能有效去除宿主DNA殘余。②確認(rèn)產(chǎn)品中雜質(zhì)含量符合標(biāo)準(zhǔn)要求。非特異性的DNA檢測(cè)結(jié)果不能區(qū)分究竟是生產(chǎn)中污染、檢測(cè)污染、或是工藝缺陷引起的DNA殘余，就無法為解決方案提供有效信息。在嚴(yán)格的生產(chǎn)體系中，殘留DNA檢測(cè)是解決工藝合理性問題，任何外源污染問題都?xì)wSOP或GMP管理體系解決。③保證生物制品的安全性，生物制品中即便是微量地來源于宿主細(xì)胞的外源性DNA都有傳遞仲瘤或病毒相關(guān)基因的可能性。國家對(duì)CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的要求有哪些？杭州畢赤酵母殘留DNA檢測(cè)原理

做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒的公司有哪些？南京E1B殘留DNA檢測(cè)

南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些？①重復(fù)性好，同一樣品重復(fù)檢測(cè)20次，CV＜15%；②提取回收率好，尤其對(duì)于低濃度樣品；③操作簡(jiǎn)便，無需自行配制試劑；④檢測(cè)時(shí)間短，從樣品提取純化到出結(jié)果只需2.5h；⑤適應(yīng)性強(qiáng)，針對(duì)不同機(jī)型，不同實(shí)驗(yàn)室條件，檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定；⑥可提供自動(dòng)化服務(wù)，自動(dòng)化完成樣品核酸提取純化；⑦貨期短，供應(yīng)快；⑧完善的售后服務(wù)；

生物制品殘留的宿主細(xì)胞DNA會(huì)帶來免疫原性、至瘤性和傳染性的風(fēng)險(xiǎn)，探針雜交法和熒光探針法已不能滿足產(chǎn)品質(zhì)量控制的要求，正逐步被發(fā)達(dá)國家藥典淘汰。南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒采用Taqman探針熒光定量PCR原理，可以定量檢測(cè)生物制品樣品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。本檢測(cè)試劑盒可與南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留DNA提取試劑盒搭配使用，對(duì)樣本中殘留的CHO細(xì)胞微量DNA進(jìn)行準(zhǔn)確定量分析。 南京E1B殘留DNA檢測(cè)

南京正揚(yáng)生物科技有限公司在同行業(yè)領(lǐng)域中，一直處在一個(gè)不斷銳意進(jìn)取，不斷制造創(chuàng)新的市場(chǎng)高度，多年以來致力于發(fā)展富有創(chuàng)新價(jià)值理念的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)，在江蘇省等地區(qū)的醫(yī)藥健康中始終保持良好的商業(yè)口碑，成績(jī)讓我們喜悅，但不會(huì)讓我們止步，殘酷的市場(chǎng)磨煉了我們堅(jiān)強(qiáng)不屈的意志，和諧溫馨的工作環(huán)境，富有營養(yǎng)的公司土壤滋養(yǎng)著我們不斷開拓創(chuàng)新，勇于進(jìn)取的無限潛力，南京正揚(yáng)生物科技供應(yīng)攜手大家一起走向共同輝煌的未來，回首過去，我們不會(huì)因?yàn)槿〉昧艘稽c(diǎn)點(diǎn)成績(jī)而沾沾自喜，相反的是面對(duì)競(jìng)爭(zhēng)越來越激烈的市場(chǎng)氛圍，我們更要明確自己的不足，做好迎接新挑戰(zhàn)的準(zhǔn)備，要不畏困難，激流勇進(jìn)，以一個(gè)更嶄新的精神面貌迎接大家，共同走向輝煌回來！