美國ICSI紡錘體卵冷凍研究

無需染色紡錘體觀察技術已逐步應用于臨床輔助生殖技術中。通過該技術，醫(yī)生可以在不破壞卵母細胞活性的情況下，評估其質量并選擇合適的卵母細胞進行受精和胚胎移植，從而提高妊娠率和胚胎質量。無需對卵母細胞進行固定和染色處理，保留了細胞的活性與完整性。能夠實時監(jiān)測冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化，評估冷凍效果。能夠實時監(jiān)測冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化，評估冷凍效果。Polscope偏振光顯微成像系統(tǒng)的操作和維護需要較高的專業(yè)知識和技能。紡錘體的形態(tài)變化復雜多樣，需要豐富的經(jīng)驗和專業(yè)知識進行數(shù)據(jù)解讀和結果分析。紡錘體的微管在細胞分裂過程中起著橋梁和牽引的作用。美國ICSI紡錘體卵冷凍研究

紡錘體成像技術的中心在于提高成像的分辨率和速度，以捕捉紡錘體的精細結構和動態(tài)變化。以下是幾種主要的紡錘體成像技術的技術原理：結構光照明顯微鏡（SIM）：SIM通過引入已知的空間調(diào)制光場，使樣品發(fā)出具有特定空間頻率的熒光信號。通過采集多個不同空間頻率的熒光圖像，并利用算法進行重建，SIM可以實現(xiàn)超越傳統(tǒng)熒光顯微鏡分辨率的成像。這種方法不僅提高了成像的分辨率，還保持了較快的成像速度和較好的細胞活性。受激輻射損耗顯微鏡（STED）：STED利用一束聚焦的激光束（稱為STED束）來抑制樣品中特定區(qū)域的熒光信號。通過精確控制STED束的位置和強度，STED可以實現(xiàn)超越衍射極限的成像分辨率。這種方法特別適用于觀測紡錘體等復雜結構中的精細細節(jié)。單分子定位顯微鏡（SMLM）：SMLM通過檢測樣品中單個熒光分子的位置來實現(xiàn)高分辨率成像。由于熒光分子的隨機閃爍特性，SMLM可以在時間域上分離不同分子的熒光信號，從而實現(xiàn)對單個分子的精確定位。這種方法不僅提高了成像的分辨率，還提供了對紡錘體中單個微管和蛋白質分子的動態(tài)變化的觀測能力。武漢輔助生殖紡錘體Oosight Meta紡錘體在細胞分裂后期通過收縮力推動染色體分離。

Oosight影像分析系統(tǒng)采用液晶偏光成像技術，無需對卵母細胞進行染色，即可實時、清晰、高對比度地進行紡錘體結構和透明帶成像，對ICSI、核移植操作、卵母細胞質量評價等有很好的輔助作用。主要應用ICSI：在單精胞漿注射過程中定位初級卵母細胞，避免卵的破裂損傷，增強胚胎的發(fā)育潛能。卵評估：利用定量的分析數(shù)據(jù)對卵進行分級，改善對胚胎的選擇。體外成熟評估：在未成熟卵催化（IVM）過程判斷成熟期，判斷依據(jù)采用的是準確的識別紡錘體，而非不準確的極體。質量控制：利用定量的分析數(shù)據(jù)對卵進行分級，改善對胚胎的選擇。核移植：顯著提高核移植的成功率。由于在核摘除的過程可以清楚的看到核質，使得核移植的成功率增加了80%，并減少了線粒體DNA的摘除。卵冷凍研究：對冷凍的初級卵母細胞進行解凍前和解凍后的定量分析，從而判斷卵的發(fā)育力，改善妊娠率。紡錘體研究：檢測胚胎中紡錘體的發(fā)育過程，確定正常和非正常分裂率（只可用于搭配有培養(yǎng)箱的顯微鏡）。可以對染色體非正常的或非整倍體的胚胎成像，從而選擇***的前體做PGD診斷。透明帶研究：測量卵母細胞的透明帶；準確測量紡錘體和透明帶中分子排列方向的差別變化，判斷紡錘體和透明帶是否處于正常狀態(tài)

盡管成熟卵母細胞紡錘體冷凍保存技術取得了進展，但仍面臨一些挑戰(zhàn)。首先，冷凍損傷仍然是制約其臨床應用的主要問題之一。盡管玻璃化冷凍法能夠在一定程度上減少冷凍損傷，但仍無法完全避免。其次，冷凍保存后的卵母細胞在體外受精和胚胎發(fā)育過程中的表現(xiàn)仍存在不確定性。這可能與冷凍過程中紡錘體和染色體的損傷有關，也可能與冷凍保護劑的殘留毒性有關。此外，法律倫理問題也是卵母細胞冷凍保存技術面臨的一大挑戰(zhàn)。不同國家和地區(qū)對卵母細胞冷凍保存的法律和倫理規(guī)定各不相同，這在一定程度上限制了該技術的普及和應用。紡錘體的中心體在細胞分裂前會復制并分離到細胞兩極。

紡錘體是如何形成的(1)紡錘體是動植物細胞分裂期形成的與染色體正常分離直接相關的分裂器，紡錘體的裝配在有絲分裂的前期完成。動物細胞紡錘體由星體微管、極間微管、動粒微管及其結合蛋白構成，因含有星體微管故稱有星紡錘體。無中心體的動物細胞和植物細胞也能形成紡錘體，因不含有星體微管而稱之為無星紡錘體。微管是由α、β微管蛋白異源二聚體及少量微管結合蛋白聚合而成的亞穩(wěn)定動態(tài)結構。動物細胞的中心體由一對相互垂直的圓筒狀中心粒及中心體基質構成。它是紡錘體微管向外生長的**，又稱微管組織中心。在有絲分裂前間期的S期初期，中心體開始復制倍增，在G2期結束時完成。在細胞分裂期前期，間期復制倍增的兩個中心體分離，每一個中心體形成放射狀排列的微管，稱為星體，每個中心體是它自身星體的**。在有絲分裂細胞周期的分裂期，微管通過持續(xù)增加和丟失組成微管的微管蛋白亞基來實現(xiàn)微管的聚合和解聚，微管始終處于生長和縮短的更替中。在分裂前期，紡錘體微管由游離的微管蛋白組裝而成，介導染色體的運動；分裂末期，紡錘體微管解聚，又組裝形成細胞質微管網(wǎng)絡。紡錘體微管包括動粒微管、極間微管和星體微管.紡錘體在細胞分裂中的精確調(diào)控是生物體發(fā)育的基礎。北京雙折射性紡錘體加熱臺

紡錘體的研究有助于揭示細胞分裂過程中的錯誤修復機制。美國ICSI紡錘體卵冷凍研究

紡錘體觀測儀在補救ICSI中的應用我們知道，成熟的卵母細胞排出***極體。IVF加入精子后，精子會穿透層層障礙**終進入卵子，隨著時間的推移，卵子的紡錘體會將染色單體拉向兩極，進而排出第二極體，再往后大約加精后9-16小時，雌雄原核會出現(xiàn)，而原核的出現(xiàn)才是受精的標志。但是對于那些沒有受精的卵子，到了原核出現(xiàn)的時間窗，發(fā)現(xiàn)沒有受精時再去補救ICSI，往往錯過了卵子的比較好受精時間，因為沒有受精的卵子會在體外老化，即使受精，胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以，我們在加精后的4-6小時，通過觀察第二極體的排出來初步判斷是否受精，**的增加了那些受精障礙患者的受精率，也避免了卵子的老化。當然，偶爾也會出現(xiàn)錯誤補救。文獻報道對IVF受精后的未排出第二極體的卵母細胞進行ICSI補救，實驗組用紡錘體觀測儀觀察并統(tǒng)計紡錘體的數(shù)目，82.7%含有一個紡錘體，17.3%含有兩個紡錘體，并對含有一個紡錘體的卵母細胞進行補救ICSI；而對照組并未用紡錘體觀測儀觀察紡錘體，只對未排出第二極體的卵母細胞進行補救ICSI。結果發(fā)現(xiàn)，使用紡錘體觀測儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率，降低多原核受精比率。美國ICSI紡錘體卵冷凍研究