CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)根據(jù)產(chǎn)品從生產(chǎn)、運(yùn)輸、處理、給藥、隨訪等流程的時(shí)間順序，將關(guān)于CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)列舉如下。所列舉的風(fēng)險(xiǎn)并非全部，在撰寫CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃時(shí)，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品特性、作用靶點(diǎn)、作用機(jī)制、非臨床研究和臨床試驗(yàn)中暴露的安全性信息等。與產(chǎn)品的質(zhì)量特征、儲(chǔ)存和分配相關(guān)的對(duì)患者造成的風(fēng)險(xiǎn)。疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)：考慮T細(xì)胞的來源（自體或異體），可能存在與傳染病有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)（如病毒）。載體拷貝數(shù)評(píng)估結(jié)構(gòu)，歡迎來電咨詢上海唯可！連云港細(xì)胞療法載體拷貝數(shù)企業(yè)人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體分類：高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體，ColE1、pMB...

流式檢測(cè)CAR+T細(xì)胞數(shù)量，較，作者用FC流式評(píng)估了用axis-cel和tisasa-celzhiliao的患者的CAR+T細(xì)胞的數(shù)量。在CAR-T細(xì)胞給藥后5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)冷凍的PBMCs上對(duì)UPN#009(軸細(xì)胞)和UPN#020(組織細(xì)胞)進(jìn)行了回顧性FC試驗(yàn)。CAR-T細(xì)胞的數(shù)量測(cè)定每ul血液。從圖4中可以明顯看出，兩種方法都可以觀察到CAR-T細(xì)胞數(shù)量的高度收斂。值得注意的是，所有三種方法(fc、dPCR和qPCR)都檢測(cè)到了第35天UPN#009中CAR-T細(xì)胞數(shù)量的復(fù)蘇。這些數(shù)據(jù)與我們小組之前觀察到的基于PCR和基于fc的定量的高一致性相一致。載體拷貝數(shù)看什么數(shù)據(jù)？杭州CAR-T載...

嵌合抗原受體（Chimericantigenreceptor，CAR）-T細(xì)胞（CAR-T）是指通過基因修飾技術(shù)，使用病毒等載體將帶有特異性抗原識(shí)別結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)、共刺激信號(hào)jihuo區(qū)等遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)入自體或異體T細(xì)胞形成的。CAR-T回輸?shù)交颊唧w內(nèi)后，可與腫瘤細(xì)胞表面特異性抗原相結(jié)合而jihuo，通過釋放穿孔素、顆粒酶等直接殺傷腫瘤細(xì)胞達(dá)到zhiliaoliu的目的。CAR-T對(duì)多種血液liu顯示了較好的臨床效果，對(duì)實(shí)體瘤zhiliao也表現(xiàn)出了較大的zhiliao潛力。目前已有多個(gè)產(chǎn)品經(jīng)美國、歐盟、中國批準(zhǔn)上市，適應(yīng)癥涉及急性B淋巴細(xì)胞白血病、B淋巴細(xì)胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤。用于檢測(cè)單個(gè)...

關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因zhiliao載體在靶細(xì)胞或相關(guān)替代細(xì)胞的基因組中整合的影響如在優(yōu)勢(shì)克隆、克隆性生長是否導(dǎo)致惡性。依據(jù)載體在靶細(xì)胞基因組中整合能力的不同，可分為非整合型、定點(diǎn)整合型、弱整合型、隨機(jī)整合型等不同類型?；蜣D(zhuǎn)導(dǎo)與修飾的作用機(jī)制包括同源重組、非同源重組等。因此，需要根據(jù)多方面因素、針對(duì)不同類型產(chǎn)品的特性進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和控制。應(yīng)通過綜合風(fēng)險(xiǎn)分析來論...

γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（RetroviralVector）：早期臨床試驗(yàn)曾發(fā)現(xiàn)，逆轉(zhuǎn)錄病毒對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行基因改造回輸人體后誘導(dǎo)了的發(fā)生。目前對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的臨床使用安全性仍在探索中，建議謹(jǐn)慎使用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體進(jìn)行分裂活躍的干細(xì)胞類產(chǎn)品的基因編輯。慢病毒載體（LentiviralVector）：。慢病毒載體生產(chǎn)和臨床使用的主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)包括：（1）生產(chǎn)過程中可能產(chǎn)生復(fù)制型慢病毒。（2）載體與慢病毒多核苷酸序列進(jìn)行體內(nèi)重組，（3）在活性基因中或其附近插入前病毒從而可能引起或促進(jìn)。基因拷貝數(shù)是指:某一種基因或某一段特定的DNA序列在單倍體基因組中出現(xiàn)的數(shù)目。溫州載體拷貝數(shù)實(shí)驗(yàn)室嵌合抗原受體（Chim...

一般情況下重組載體基因較少整合到基因組中，但近年來已發(fā)現(xiàn)載體基因整合到特定基因座中導(dǎo)致的可能性。建議設(shè)計(jì)時(shí)充分考慮重組載體的安全性，關(guān)注目的基因的啟動(dòng)子選擇、給藥劑量、整合區(qū)域等多種相關(guān)因素。建議對(duì)病毒載體進(jìn)行全基因組測(cè)序。另外，也可將病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)目標(biāo)細(xì)胞后，對(duì)整合有載體序列的細(xì)胞基因組進(jìn)行測(cè)序，說明載體骨架及目的基因序列的準(zhǔn)確性。對(duì)于整合型載體還應(yīng)考慮插入突變的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)對(duì)插入位點(diǎn)進(jìn)行分析并說明對(duì)細(xì)胞存在的潛在的安全性影響，并對(duì)分析方法的合理性進(jìn)行說明。載體拷貝數(shù)服務(wù)，服務(wù)好，效率高，人員更專業(yè)，選上海唯可生物。南通VCN載體拷貝數(shù)政策主要有兩方面的原因：一方面，高拷貝數(shù)時(shí)外源基因的表達(dá)量不再...

在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定基因的數(shù)目。一般檢測(cè)方法有若是測(cè)序結(jié)果，可選用censor軟件檢測(cè)相關(guān)拷貝數(shù)。Southernblot是一種常用的DNA定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的DNA樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號(hào)，通過檢測(cè)信號(hào)的有無、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品定性、定量，從而計(jì)算出轉(zhuǎn)入的拷貝數(shù)。Southern法準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)，但存在費(fèi)時(shí)費(fèi)力的缺點(diǎn)。另外，由于 Southern 法檢測(cè)不經(jīng)過靶片段的擴(kuò)增（ PCR ），一般每個(gè)電泳通道需要 10-30 μ g 的 DNA ，在實(shí)際操作中就需要較大量的植物材料...

在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定質(zhì)粒的數(shù)目。根據(jù)復(fù)制特性，質(zhì)粒分嚴(yán)緊型和松弛型兩類，前者在細(xì)胞中只含1～2個(gè)，而后者含10～15個(gè)以上。恒定的拷貝數(shù)與質(zhì)粒復(fù)制控制系統(tǒng)、宿主細(xì)胞遺傳背景及生長條件有關(guān)。質(zhì)粒復(fù)制控制系統(tǒng)首先通過調(diào)節(jié)復(fù)制的起始點(diǎn)來控制拷貝數(shù)，調(diào)節(jié)因素包括阻遏蛋白、反義RNA和某些順向重復(fù)序列。有些質(zhì)粒還有其他控制系統(tǒng)，如有分配功能的par系統(tǒng)和確保質(zhì)粒穩(wěn)定遺傳的ccd系統(tǒng)。一旦質(zhì)粒上與調(diào)控有關(guān)的基因或位點(diǎn)突變，可使拷貝數(shù)明顯增加或減少。在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定基因的數(shù)目。細(xì)胞產(chǎn)品中的外源病毒載體基因拷貝數(shù)不高于5拷貝/細(xì)胞。病毒載體拷貝數(shù)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞分布、遷移和增殖引起的后果。與伴隨zhilia...

CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)根據(jù)產(chǎn)品從生產(chǎn)、運(yùn)輸、處理、給藥、隨訪等流程的時(shí)間順序，將關(guān)于CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)列舉如下。所列舉的風(fēng)險(xiǎn)并非全部，在撰寫CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃時(shí)，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品特性、作用靶點(diǎn)、作用機(jī)制、非臨床研究和臨床試驗(yàn)中暴露的安全性信息等。與產(chǎn)品的質(zhì)量特征、儲(chǔ)存和分配相關(guān)的對(duì)患者造成的風(fēng)險(xiǎn)。疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)：考慮T細(xì)胞的來源（自體或異體），可能存在與傳染病有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)（如病毒）。CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品中的轉(zhuǎn)基因拷貝信息(載體拷貝數(shù)(VCN))對(duì)于保證患者安全至關(guān)重要。連云港 LV載體拷貝數(shù)分析質(zhì)粒載體的分類：按復(fù)...

質(zhì)粒的不相容性通俗來說，就是一山不能容二虎。但是作為科學(xué)來說，我們需要一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)亩x?！袄猛粡?fù)制系統(tǒng)的兩個(gè)質(zhì)粒會(huì)在復(fù)制和隨后向自細(xì)胞的分配過程中彼此競爭，這樣的質(zhì)粒在細(xì)菌培養(yǎng)物中不能和平共處，這種現(xiàn)象稱之為不相容性”。那要怎么才能在一個(gè)菌里面使用兩個(gè)質(zhì)粒呢？簡單的方法就是使用不同復(fù)制源的且?guī)в胁煌剐曰虻膬蓚€(gè)質(zhì)粒。pUCori：復(fù)制起始點(diǎn)，pUC為高拷貝表達(dá)質(zhì)粒（120-200個(gè)/細(xì)胞）。Amp：氨芐抗性，為原核抗性，用于質(zhì)粒抽提時(shí)的篩選。U6promoter：U6啟動(dòng)子，真核啟動(dòng)子，啟動(dòng)shRNA的表達(dá)。CMV：真核啟動(dòng)子，啟動(dòng)ZsGreen1的表達(dá)。ZsGreen1：第三代綠色熒光蛋...

載體拷貝數(shù)一般檢測(cè)方法有：若是測(cè)序結(jié)果，可選用censor軟件檢測(cè)相關(guān)拷貝數(shù)。Southernblot是一種常用的DNA定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的DNA樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號(hào)，通過檢測(cè)信號(hào)的有無、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品定性、定量，從而計(jì)算出轉(zhuǎn)入的拷貝數(shù)。Southern法準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)，但存在費(fèi)時(shí)費(fèi)力的缺點(diǎn)。另外，由于Southern法檢測(cè)不經(jīng)過靶片段的擴(kuò)增（PCR），一般每個(gè)電泳通道需要10-30μg的DNA，在實(shí)際操作中就需要較大量的植物材料來提取DNA，而轉(zhuǎn)基因植物的愈傷組織在無菌...

在基因工程中，質(zhì)粒的拷貝數(shù)應(yīng)該怎么理解?為什么構(gòu)建載體時(shí)要選擇高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體?把細(xì)胞當(dāng)做工廠，質(zhì)粒就是廠房里的流水線，拷貝數(shù)就流水線的數(shù)量在理想狀態(tài)下，選擇盡量多的流水線，這樣能得到的產(chǎn)品多，這是很自然的選擇實(shí)際上，高拷貝也有它的問題，當(dāng)流水線多到一定程度，決定產(chǎn)量就不只是流水線的多寡，工人的工作效率，也就是轉(zhuǎn)錄翻譯水平，也會(huì)影響到較終的產(chǎn)量此外，過多的流水線帶來放不下的情況，工廠沒那么大地方，原材料供應(yīng)不上，吃不消，也會(huì)影響到工廠正常運(yùn)轉(zhuǎn)所以，拷貝數(shù)只是一個(gè)方面，構(gòu)建載體要綜合考慮各方面及實(shí)際用途。有時(shí)低拷貝質(zhì)粒滲漏表達(dá)，反而有奇效。質(zhì)?？截悢?shù)分為嚴(yán)謹(jǐn)型與松馳型。南京基因療法載體拷貝數(shù)實(shí)...

在沒有接受任何橋接zhiliao的3名患者中，1名患者有PR,2名患者有PD之前接受過CAR-T細(xì)胞zhiliao。CAR-T細(xì)胞zhiliao后，16例患者發(fā)生CRS，其中3例為高級(jí)別CRS。6例ICANS,2例ICANS等級(jí)高。CAR-T細(xì)胞拷貝的峰值水平在43到159,304拷貝/ugPBMCDNA之間。在CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增高峰(UPN#001和#003)的患者中觀察到高ICANS。1例患者(UPN#017)在CAR-T細(xì)胞zhiliao后1周內(nèi)死亡，原因是噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增多/巨噬細(xì)胞活化綜合征。其余19例患者可評(píng)估臨床療效:14例(74%)患者zhiliao有效，8例(42%)...

4目前已有多個(gè)產(chǎn)品經(jīng)美國、歐盟、中國批準(zhǔn)上市，5適應(yīng)癥涉及急性B淋巴細(xì)胞白血病、B淋巴細(xì)胞瘤、多發(fā)性骨髓6瘤。由于CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)和作用機(jī)制，在開展CAR-7T臨床試驗(yàn)過程中也暴露出了細(xì)胞因子釋放綜合征（Cytokine8releasesyndrome,CRS）、免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征9（ImmuneEffectorCell-associatedNeurotoxicitySyndrome，ICANS）10等如不及時(shí)采取妥當(dāng)?shù)募本却胧┛赡苤旅牟涣挤磻?yīng)。除自體來11源的CAR-T細(xì)胞外，移植供體來源CAR-T細(xì)胞以及通用型CAR-12T細(xì)胞也已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段。由于...

用低拷貝質(zhì)粒作表達(dá)載體有什么好處？因?yàn)楦呖截愘|(zhì)粒穩(wěn)定性低，而且給宿主細(xì)胞的壓力大。低拷貝數(shù)的質(zhì)粒DNA在宿主細(xì)胞分裂前只能復(fù)制1～2次，而多拷貝數(shù)質(zhì)粒可以在細(xì)胞分裂前復(fù)制成10～200拷貝。高拷貝數(shù)的質(zhì)粒稱為松弛型質(zhì)粒(relaxedplasmid)，單獨(dú)于細(xì)菌細(xì)胞而自主復(fù)制；低拷貝數(shù)的質(zhì)粒一般是嚴(yán)緊型質(zhì)粒(stringentplasmid)，它們的復(fù)制隨細(xì)菌染色體的復(fù)制同步進(jìn)行。一般來說，外源基因的表達(dá)量隨拷貝數(shù)的增加而提高，但是當(dāng)拷貝數(shù)很大時(shí)，拷貝數(shù)與發(fā)酵目標(biāo)產(chǎn)物產(chǎn)率的這種關(guān)系卻不存在。如何計(jì)算質(zhì)粒的拷貝數(shù)？杭州慢病毒載體拷貝數(shù)企業(yè)CAR-T細(xì)胞輸注后患者反應(yīng)及毒性分析：本次收集攻擊113...

質(zhì)粒載體的分類：按復(fù)制形式：分為嚴(yán)緊型和松弛型復(fù)制。根據(jù)質(zhì)粒DNA復(fù)制與宿主之間的關(guān)系或在宿主細(xì)胞的拷貝數(shù)的多少，可以將質(zhì)粒分為兩種不同的復(fù)制類型：嚴(yán)緊型和松弛型。嚴(yán)緊型質(zhì)粒復(fù)制受宿主染色體DNA復(fù)制的嚴(yán)格控制，拷貝數(shù)較小一般只有1~3個(gè)拷貝。疏松型質(zhì)粒的復(fù)制宿主的控制比較松，在宿主中的拷貝數(shù)比較多，一般有10~200個(gè)拷貝，有時(shí)可達(dá)到700個(gè)。按基因轉(zhuǎn)移性：分兩類：（1）傳遞性質(zhì)粒：常為大型、嚴(yán)緊型質(zhì)粒；（2）非傳遞性質(zhì)粒：多為小型、松弛型質(zhì)粒。按遺傳性狀、產(chǎn)物分類（1）kangshengs抗性：如氨芐西林、氯霉素抗性；（2）限制酶-修飾酶（R-M）系統(tǒng)：如hsdR-菌株可使DNA甲基化，但...

實(shí)時(shí)熒光定量PCR，其定量的基本原理是在PCR反應(yīng)體系中加入非特異性的熒光染料（如：SYBRGREENI）或特異性的熒光探針（如：Taqman探針），實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光量的變化，獲得不同樣品達(dá)到一定的熒光信號(hào)（閾值）時(shí)所需的循環(huán)次數(shù)：CT值（CycleThreshold）；通過將已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品的CT值與其濃度的對(duì)數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以準(zhǔn)確定量樣品的濃度。熒光定量PCR技術(shù)具有簡便、快捷的優(yōu)點(diǎn)，能夠有效擴(kuò)增低拷貝的靶片段DNA，對(duì)每克樣品中20pg-10ng的轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行有效檢測(cè)。同時(shí)，與Southern法相比，熒光定量PCR技術(shù)可對(duì)T-DNA的不同序列進(jìn)行擴(kuò)增，因此能實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因品系中的基因重組的...

γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（RetroviralVector）：早期臨床試驗(yàn)曾發(fā)現(xiàn)，逆轉(zhuǎn)錄病毒對(duì)造血干細(xì)胞進(jìn)行基因改造回輸人體后誘導(dǎo)了的發(fā)生。目前對(duì)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的臨床使用安全性仍在探索中，建議謹(jǐn)慎使用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體進(jìn)行分裂活躍的干細(xì)胞類產(chǎn)品的基因編輯。慢病毒載體（LentiviralVector）：。慢病毒載體生產(chǎn)和臨床使用的主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)包括：（1）生產(chǎn)過程中可能產(chǎn)生復(fù)制型慢病毒。（2）載體與慢病毒多核苷酸序列進(jìn)行體內(nèi)重組，（3）在活性基因中或其附近插入前病毒從而可能引起或促進(jìn)。對(duì)于質(zhì)粒載體,拷貝數(shù)是我們關(guān)心的特性之一。杭州CAR-T載體拷貝數(shù)服務(wù)一般情況下重組載體基因較少整合到基因組中，但近年來...

ddPCR與qPCR在監(jiān)測(cè)CART細(xì)胞拷貝數(shù)靈敏度比較，CAR-T細(xì)胞免疫zhiliao發(fā)展迅速，CAR-T細(xì)胞zhiliao后的動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)對(duì)患者隨訪至關(guān)重要，對(duì)指導(dǎo)接受CAR - T細(xì)胞zhiliao的患者的臨床決策也很重要。在給藥前，CAR - T細(xì)胞產(chǎn)品內(nèi)的轉(zhuǎn)基因副本信息，如載體副本數(shù)量，對(duì)保證患者的安全性非常重要。然而，目前還缺乏開放區(qū)域定量檢測(cè)CAR - T細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)方法。一些機(jī)構(gòu)已經(jīng)建立了內(nèi)部分析來監(jiān)測(cè)CAR - T細(xì)胞頻率。2022年2月11日，MARIA?LUISA SCHUBERT等團(tuán)隊(duì)在INTERNATIONAL JOURNAL OF ONCOLOGY 上發(fā)表了題為：Com...

流式檢測(cè)CAR+T細(xì)胞數(shù)量，較，作者用FC流式評(píng)估了用axis-cel和tisasa-celzhiliao的患者的CAR+T細(xì)胞的數(shù)量。在CAR-T細(xì)胞給藥后5個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)冷凍的PBMCs上對(duì)UPN#009(軸細(xì)胞)和UPN#020(組織細(xì)胞)進(jìn)行了回顧性FC試驗(yàn)。CAR-T細(xì)胞的數(shù)量測(cè)定每ul血液。從圖4中可以明顯看出，兩種方法都可以觀察到CAR-T細(xì)胞數(shù)量的高度收斂。值得注意的是，所有三種方法(fc、dPCR和qPCR)都檢測(cè)到了第35天UPN#009中CAR-T細(xì)胞數(shù)量的復(fù)蘇。這些數(shù)據(jù)與我們小組之前觀察到的基于PCR和基于fc的定量的高一致性相一致。新型CAR/TCR T細(xì)胞臨床產(chǎn)品中載...

質(zhì)粒載體的分類：按復(fù)制形式：分為嚴(yán)緊型和松弛型復(fù)制。根據(jù)質(zhì)粒DNA復(fù)制與宿主之間的關(guān)系或在宿主細(xì)胞的拷貝數(shù)的多少，可以將質(zhì)粒分為兩種不同的復(fù)制類型：嚴(yán)緊型和松弛型。嚴(yán)緊型質(zhì)粒復(fù)制受宿主染色體DNA復(fù)制的嚴(yán)格控制，拷貝數(shù)較小一般只有1~3個(gè)拷貝。疏松型質(zhì)粒的復(fù)制宿主的控制比較松，在宿主中的拷貝數(shù)比較多，一般有10~200個(gè)拷貝，有時(shí)可達(dá)到700個(gè)。按基因轉(zhuǎn)移性：分兩類：（1）傳遞性質(zhì)粒：常為大型、嚴(yán)緊型質(zhì)粒；（2）非傳遞性質(zhì)粒：多為小型、松弛型質(zhì)粒。按遺傳性狀、產(chǎn)物分類（1）kangshengs抗性：如氨芐西林、氯霉素抗性；（2）限制酶-修飾酶（R-M）系統(tǒng)：如hsdR-菌株可使DNA甲基化，但...

在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定基因的數(shù)目。一般檢測(cè)方法有若是測(cè)序結(jié)果，可選用censor軟件檢測(cè)相關(guān)拷貝數(shù)。Southernblot是一種常用的DNA定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的DNA樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號(hào)，通過檢測(cè)信號(hào)的有無、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品定性、定量，從而計(jì)算出轉(zhuǎn)入的拷貝數(shù)。Southern法準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)，但存在費(fèi)時(shí)費(fèi)力的缺點(diǎn)。另外，由于 Southern 法檢測(cè)不經(jīng)過靶片段的擴(kuò)增（ PCR ），一般每個(gè)電泳通道需要 10-30 μ g 的 DNA ，在實(shí)際操作中就需要較大量的植物材料...

拷貝數(shù)，是指某基因（可以是質(zhì)粒）在某一生物的基因組中的個(gè)數(shù)。單拷貝就是該基因在該生物基因組中只有一個(gè)，多拷貝則指有多個(gè)。在細(xì)菌細(xì)胞中，根據(jù)復(fù)制特性，質(zhì)粒分嚴(yán)緊型和松弛型兩類，前者在細(xì)胞中只含1?2個(gè)，而后者含10?15個(gè)以上。恒定的拷貝數(shù)與質(zhì)粒復(fù)制控制系統(tǒng)、宿主細(xì)胞遺傳背景及生長條件有關(guān)?？截悢?shù)變異(Copynumbervariation,CNV)是由基因組發(fā)生重排而導(dǎo)致的,一般指長度為1kb以上的基因組大片段的拷貝數(shù)增加或者減少,主要表現(xiàn)為亞顯微水平的缺失和重復(fù)。載體拷貝數(shù)檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果快，結(jié)果準(zhǔn)確率高！北京CAR-T載體拷貝數(shù)安評(píng)關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhili...

實(shí)時(shí)熒光定量PCR，其定量的基本原理是在PCR反應(yīng)體系中加入非特異性的熒光染料（如：SYBRGREENI）或特異性的熒光探針（如：Taqman探針），實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光量的變化，獲得不同樣品達(dá)到一定的熒光信號(hào)（閾值）時(shí)所需的循環(huán)次數(shù)：CT值（CycleThreshold）；通過將已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品的CT值與其濃度的對(duì)數(shù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，就可以準(zhǔn)確定量樣品的濃度。熒光定量PCR技術(shù)具有簡便、快捷的優(yōu)點(diǎn)，能夠有效擴(kuò)增低拷貝的靶片段DNA，對(duì)每克樣品中20pg-10ng的轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行有效檢測(cè)。同時(shí)，與Southern法相比，熒光定量PCR技術(shù)可對(duì)T-DNA的不同序列進(jìn)行擴(kuò)增，因此能實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因品系中的基因重組的...

載體拷貝數(shù)一般檢測(cè)方法有：若是測(cè)序結(jié)果，可選用censor軟件檢測(cè)相關(guān)拷貝數(shù)。Southernblot是一種常用的DNA定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的DNA樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相DNA的位置上顯示出雜交信號(hào)，通過檢測(cè)信號(hào)的有無、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品定性、定量，從而計(jì)算出轉(zhuǎn)入的拷貝數(shù)。Southern法準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)，但存在費(fèi)時(shí)費(fèi)力的缺點(diǎn)。另外，由于Southern法檢測(cè)不經(jīng)過靶片段的擴(kuò)增（PCR），一般每個(gè)電泳通道需要10-30μg的DNA，在實(shí)際操作中就需要較大量的植物材料來提取DNA，而轉(zhuǎn)基因植物的愈傷組織在無菌...

CAR-T細(xì)胞輸注后患者反應(yīng)及毒性分析：本次收集攻擊113例患者，采用qPCR和dPCR檢測(cè)20例使用axis-cel和tissa-cel處理的gDNA樣本的拷貝數(shù)。在接受tissa-celzhiliao的患者中，9例患者接受了DLBCLzhiliao，1例患者接受了ALLzhiliao。大多數(shù)患者為男性，zhiliao患者的中位年齡為56.5歲(范圍10-71歲)，患者之前接受了2-7個(gè)zhiliao線。由于血液病或進(jìn)展性疾病(PD)的高負(fù)擔(dān)，大多數(shù)患者接受了淋巴清理和CAR-T細(xì)胞之間的橋接zhiliao。其中4例患者完全緩解(CR,n=2)或部分緩解(PR,n=2)，5例患者病情穩(wěn)定(S...

質(zhì)粒載體的分類：按復(fù)制形式：分為嚴(yán)緊型和松弛型復(fù)制。根據(jù)質(zhì)粒DNA復(fù)制與宿主之間的關(guān)系或在宿主細(xì)胞的拷貝數(shù)的多少，可以將質(zhì)粒分為兩種不同的復(fù)制類型：嚴(yán)緊型和松弛型。嚴(yán)緊型質(zhì)粒復(fù)制受宿主染色體DNA復(fù)制的嚴(yán)格控制，拷貝數(shù)較小一般只有1~3個(gè)拷貝。疏松型質(zhì)粒的復(fù)制宿主的控制比較松，在宿主中的拷貝數(shù)比較多，一般有10~200個(gè)拷貝，有時(shí)可達(dá)到700個(gè)。按基因轉(zhuǎn)移性：分兩類：（1）傳遞性質(zhì)粒：常為大型、嚴(yán)緊型質(zhì)粒；（2）非傳遞性質(zhì)粒：多為小型、松弛型質(zhì)粒。按遺傳性狀、產(chǎn)物分類（1）kangshengs抗性：如氨芐西林、氯霉素抗性；（2）限制酶-修飾酶（R-M）系統(tǒng)：如hsdR-菌株可使DNA甲基化，但...

基因的拷貝數(shù)與幾倍體是沒什么關(guān)系的？在不考慮突變的前提下，基因的拷貝數(shù)和幾倍體是直接相關(guān)的，因?yàn)榛虻妮d體是染色體，幾倍體是指染色體的倍數(shù)。打個(gè)比方，人有46條染色體，2二倍體，在人的21號(hào)染色體上有一個(gè)等位基因A，純合子。那么正常人基因A的拷貝數(shù)是2，而21三體綜合癥（21號(hào)染色體有3條，即21號(hào)染色體是三倍體）的患者基因A的拷貝數(shù)是3。另外發(fā)生基因突變也可能會(huì)導(dǎo)致基因拷貝數(shù)的變化。以人類基因組為例，我們講A基因在人類基因組中存在兩個(gè)拷貝，那意思是說在一套人類基因組中有兩個(gè)這樣的基因，就是所說的等位基因，且位于一對(duì)染色體上，即每個(gè)染色體組中各有一個(gè)，因?yàn)槿旧w是基因的載體，通俗的講說基因是在...

致瘤性的風(fēng)險(xiǎn):考慮產(chǎn)品特征，所使用整合性載體(如逆與產(chǎn)品的儲(chǔ)存、運(yùn)輸和分配有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)（如保存、冷凍和解凍過程）、冷鏈或其他類型受控溫度條件被突破的風(fēng)險(xiǎn)、與產(chǎn)品穩(wěn)定性有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)，這可能會(huì)影響CAR-T細(xì)胞的生物學(xué)活性進(jìn)而導(dǎo)致治療失敗。與產(chǎn)品活性相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)與產(chǎn)品活性有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)如T細(xì)胞jihuo引起的CRS、ICANS等。與患者基礎(chǔ)疾病（或潛在疾?。┗蚺c合并使用其他藥物的相互作用相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)。發(fā)生有害的免疫原性反應(yīng)及其后果（包括過敏反應(yīng)、產(chǎn)生中和抗體等）。與患者自身情況相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)（如移植物抗宿主病、惡性liu）。對(duì)患者或供者細(xì)胞進(jìn)行預(yù)期和非預(yù)期基因修飾有關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)（如細(xì)胞凋亡、功能改變、惡性liu）。載...

在沒有接受任何橋接zhiliao的3名患者中，1名患者有PR,2名患者有PD之前接受過CAR-T細(xì)胞zhiliao。CAR-T細(xì)胞zhiliao后，16例患者發(fā)生CRS，其中3例為高級(jí)別CRS。6例ICANS,2例ICANS等級(jí)高。CAR-T細(xì)胞拷貝的峰值水平在43到159,304拷貝/ugPBMCDNA之間。在CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增高峰(UPN#001和#003)的患者中觀察到高ICANS。1例患者(UPN#017)在CAR-T細(xì)胞zhiliao后1周內(nèi)死亡，原因是噬血細(xì)胞性淋巴組織細(xì)胞增多/巨噬細(xì)胞活化綜合征。其余19例患者可評(píng)估臨床療效:14例(74%)患者zhiliao有效，8例(42%)...