如今，實時熒光定量PCR(qPCR)是一種優(yōu)先的支原體檢測方法，因為它準(zhǔn)確、靈敏且省時。與常規(guī)PCR不同，qPCR允許實時觀察支原體DNA的DNA擴(kuò)增，因為特異性引物在熒光探針存在的情況下與其靶序列結(jié)合，從而導(dǎo)致DNA擴(kuò)增和熒光增強(qiáng)。此外，qPCR比常...

南京正揚(yáng)CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測原理：試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。PCR反應(yīng)過程中通過熒光標(biāo)記的特異性探針檢測PCR產(chǎn)物量，通過連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)體系中熒光數(shù)值的變化，可即時反...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測：實時熒光定量PCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的原理和方法：實時熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時，在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，產(chǎn)物的增加可以通過熒光信號指示，通過實時監(jiān)控PCR體系中的熒光信號，對樣本中初始模板進(jìn)行定量分析...

實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍，如宿主細(xì)胞殘留DNA檢測，鼠源、禽源等外源病毒檢測，微生物快檢（支原體、分枝桿菌、細(xì)菌、zhen菌等），復(fù)制型病毒檢測（RCL、RCR、rcAAV等）、質(zhì)粒拷貝數(shù)檢測及其它工藝雜質(zhì)檢測等。q...

基于細(xì)胞培養(yǎng)法的rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測方法，該方法的原理是通過不斷的細(xì)胞傳代使得rcAAV實現(xiàn)擴(kuò)增，之后再利用qPCR或Southern-blot的方法對rcAAV進(jìn)行檢測，能保證檢測到的rcAAV都具有復(fù)制能力，是目前常用的檢測方法。然而，其檢測敏感...

基于細(xì)胞培養(yǎng)法的rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測方法，該方法的原理是通過不斷的細(xì)胞傳代使得rcAAV實現(xiàn)擴(kuò)增，之后再利用qPCR或Southern-blot的方法對rcAAV進(jìn)行檢測，能保證檢測到的rcAAV都具有復(fù)制能力，是目前常用的檢測方法。然而，其檢測敏感...

實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍，如宿主細(xì)胞殘留DNA檢測，鼠源、禽源等外源病毒檢測，微生物快檢（支原體、分枝桿菌、細(xì)菌、zhen菌等），復(fù)制型病毒檢測（RCL、RCR、rcAAV等）、質(zhì)?？截悢?shù)檢測及其它工藝雜質(zhì)檢測等。q...

南京正揚(yáng)CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測原理：試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。PCR反應(yīng)過程中通過熒光標(biāo)記的特異性探針檢測PCR產(chǎn)物量，通過連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)體系中熒光數(shù)值的變化，可即時反...

各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的要求：各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA的態(tài)度謹(jǐn)慎且明確，要求各制藥企業(yè)建立詳細(xì)可行、靈敏度高的檢測方法，用于驗證藥品的純化過程可以去除殘留DNA，并對終產(chǎn)品的產(chǎn)品放行嚴(yán)格把關(guān)，避免攜帶外...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測過程中，qPCR反應(yīng)體系配制環(huán)節(jié)有哪些注意事項？①qPCR的整個操作要低溫環(huán)境進(jìn)行，防止模板的降解，試劑避免反復(fù)凍融。②配制反應(yīng)體系前試劑要充分混勻，除了模板外的反應(yīng)體系要統(tǒng)一配制，然后再分配至qPCR管中，配制的時候考慮到操作或耗材帶來...

美國藥典（USP）對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘余限度不得超過100pg/劑量，對于大劑量的如單克隆抗體的生物制品，根據(jù)其殘余DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/劑量...

用qPCR法進(jìn)行支原體檢測時，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線復(fù)孔間熒光信號值降低及復(fù)孔間擴(kuò)增曲線重復(fù)性差的原因可能是什么？復(fù)孔間部分曲線熒光信號值降低的現(xiàn)象比較常見，通常與反應(yīng)管內(nèi)存在氣泡相關(guān)，隨反應(yīng)溫度升高，氣泡破裂導(dǎo)致熒光信號值降低。上機(jī)前需仔細(xì)檢查反應(yīng)管內(nèi)是否有氣泡殘留。...

復(fù)制性慢病毒/復(fù)制性逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測的必要性：RCL/RCR會同逆轉(zhuǎn)錄病毒載體一樣，整合在細(xì)胞基因組中，從而產(chǎn)生因整合導(dǎo)致的原ai基因***，抑ai基因破壞或者使促細(xì)胞生長的因子高度表達(dá)而造成二次仲瘤的風(fēng)險。因其具有復(fù)制性，即產(chǎn)生具有復(fù)制能力的病毒，增加了因整...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時，出現(xiàn)擴(kuò)增效率超出標(biāo)準(zhǔn)要求（低于83.3%或高于110%）的原因有哪些？①設(shè)計的引物探針不適用：重新分析靶標(biāo)序列進(jìn)行設(shè)計。②標(biāo)曲濃度設(shè)定太高，超出標(biāo)曲線性范圍：對范圍進(jìn)行驗證，選取合適標(biāo)曲范圍。③人員操作問題，如稀釋錯誤...

慢病毒載體是以人類免疫缺陷Ⅰ型病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV-1）為基礎(chǔ)發(fā)展起來的基因醫(yī)治載體，屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒家族，又區(qū)別于一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，比逆轉(zhuǎn)錄病毒載體具有更強(qiáng)的***能力，具有容納外源性目的基因片段大、穩(wěn)定整...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL基因拷貝數(shù)檢測試劑盒（RT-PCR熒光探針法）、RCR基因拷貝數(shù)檢測試劑盒（RT-PCR熒光探針法）、rcAAV-5/N檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）既適用于基于細(xì)胞培養(yǎng)法對復(fù)制型病毒的qPCR法的檢測，也適用于對...

南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測試劑盒包括支原體DNA提取試劑盒（磁珠法）和支原體DNA檢測試劑盒（PCR-熒光探針法），支原體DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定性檢測主細(xì)胞庫、工作細(xì)胞庫、病毒種子批以及臨床***用細(xì)胞中是否有...

為什么要做支原體檢測？支原體是蕞小和蕞簡單的自我復(fù)制生命體。由于支原體體積?。?00nm），缺乏剛性的細(xì)胞壁，因此肉眼無法檢測到支原體，它們可以透過0.2μm的標(biāo)準(zhǔn)過濾膜，并對很多***都具有抵抗力。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個主要問題，不止影響實驗結(jié)果...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞DNA殘留檢測時，哪些因素會對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響？樣品核酸提取純化過程雜質(zhì)干擾的去除對qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測結(jié)果有著較大影響。樣品核酸提取純化操作步驟對DNA檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度影響較大，通常采用加樣回收試驗...

磁珠法核酸提取常見問題之磁珠殘留：導(dǎo)致磁珠殘留的可能原因：①磁珠原因：所使用的磁珠的粒徑過小、磁珠表面基團(tuán)松散、磁珠的磁含量低；②自動化核酸提取設(shè)備原因：自動化核酸提取設(shè)備的磁分離方式設(shè)計有問題、設(shè)備的磁場弱；③操作原因：使用自動化設(shè)備進(jìn)行核酸提取時所用的參數(shù)...

磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)--某一種磁珠好，就應(yīng)該在所有試劑配方中使用效果都好磁珠的種類是多種多樣的，粒徑大小不同，分散性不同，磁響應(yīng)時間不同，包被基礎(chǔ)基質(zhì)不同，外層修飾官能團(tuán)不同，包被密度不同，官能團(tuán)臂長不同，會導(dǎo)致磁珠特性千差萬別。所以不同磁珠所適應(yīng)的...

在進(jìn)行支原體檢測之前，進(jìn)行支原體核酸提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA，以便進(jìn)行后續(xù)的檢測和分析。以下是進(jìn)行支原體DNA提取的主要原因和目的：分離支原體DNA：樣品中可能存在多種細(xì)菌、***和病毒等其他生物體的DNA。通過提取支原體DNA，...

日本藥典JPXVⅢ〈G3-14-170〉對NAT法支原體檢測產(chǎn)品有關(guān)性能驗證的要求，包括檢測限（LOD）、專屬性、耐用性、可比性。其中對于耐用性的描述及要求如下：分析過程的耐用性是指方法參數(shù)有小的變動時，測定結(jié)果不受其影響的能力，同時為在正常使用中表明其可靠性...

CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生物制藥行業(yè)中的質(zhì)量控制和安全監(jiān)測。其主要用途包括：①生物制品質(zhì)量控制：通過檢測CHO細(xì)胞殘留DNA的存在和數(shù)量，可以評估生物制品的質(zhì)量和純度，確保產(chǎn)品符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和法規(guī)要求。②安全性評估：CHO細(xì)胞殘留DNA可能攜帶...

宿主細(xì)胞殘留DNA是影響生物制品安全性的關(guān)鍵因素之一，它不僅會降低生物藥的有效性，還可能帶來傳染性或致瘤性等安全問題。因此建立合適的宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法有助于監(jiān)測生產(chǎn)工藝，確保生物制品的安全性和質(zhì)量。各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對宿主細(xì)胞殘留DNA的殘留量有著嚴(yán)...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的全自動核酸提取儀是針對生物制品核酸提取的技術(shù)平臺，內(nèi)置專業(yè)優(yōu)化的前處理程序，配套本公司的自動化前處理試劑盒和配套耗材，只需一鍵操作即可完成各類生物材料和制品中的宿主細(xì)胞、微生物、病毒因子等各類微量DNA/RNA的提取純化。...

磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)--洗滌次數(shù)越多，洗滌效果越好提取得到的核酸雜質(zhì)過多時，使用者會考慮多進(jìn)行幾次洗滌，以得到更為純凈的核酸。增加洗滌次數(shù)確實有利于提純核酸，但考慮到每次洗滌都會損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂水解的可能性，所以一般來說洗滌次數(shù)控制...

美國藥典（USP）對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘余限度不得超過100pg/劑量，對于大劑量的如單克隆抗體的生物制品，根據(jù)其殘余DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/劑量...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測：《美國藥典》和《歐洲藥典》將高靈敏度、高特異性的qPCR法和非序列特異性的DNA結(jié)合蛋白法作為宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的推薦方法；《中國藥典》則收錄了特異性高的定量熒光探針qPCR法和半定量的DNA探針雜交法以及非序列特異性的熒光染色法。...

磁珠法核酸提取常見問題之磁珠結(jié)塊：導(dǎo)致磁珠結(jié)塊的可能原因：①磁珠吸附了過多雜質(zhì)，包括蛋白、脂質(zhì)、多糖等；②磁珠粒徑太小；③洗滌完畢，乙醇干燥時間過長。④磁珠磁吸附時間過長；⑤操作中途含磁珠的樣品管離心速率過高、離心時間過長；磁珠結(jié)塊的解決辦法：①優(yōu)化裂解液、結(jié)...