磁珠法核酸提取一般可以分為四步：裂解——結(jié)合——洗滌——洗脫洗滌：核酸的高電荷磷酸骨架使其比蛋白質(zhì)、多糖、脂肪等其他生物大分子物質(zhì)更具親水性，根據(jù)它們理化性質(zhì)的差異，用選擇性沉淀、層析、密度梯度離心等方法可將核酸分離、純化。用無水乙醇沉淀DNA，這是實(shí)驗(yàn)中蕞常...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的支原體檢測試劑盒在PCR試劑配制及加樣上機(jī)環(huán)節(jié)有哪些注意事項(xiàng)？①實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)注意防止外源DNA對試劑的污染，先加樣品DNA，然后進(jìn)行陽性質(zhì)控品的操作。在制備反應(yīng)試劑和添加DNA模板時(shí)，使用帶濾芯的搶頭，添加不同的試劑和不同的樣...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測：南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒的優(yōu)點(diǎn)有哪些？①試劑盒經(jīng)過獨(dú)特的設(shè)計(jì)開發(fā)，可以防止PCR產(chǎn)物污染；②產(chǎn)品檢測靈敏度高，定量限可低至1fg/μL；③試劑盒檢測準(zhǔn)確度高，試劑盒配套定量參考品，且定量參考品...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測試劑盒有哪些優(yōu)點(diǎn)？①試劑盒經(jīng)過獨(dú)特的設(shè)計(jì)開發(fā)，可以防止PCR產(chǎn)物污染；②產(chǎn)品檢測靈敏度高；③重復(fù)性好，同一樣品重復(fù)檢測20次，CV＜15%；④檢測時(shí)間短，從樣品提取純化到出結(jié)果只需2.5h...

RCL復(fù)制型慢病毒檢測的背景：CAR-T（chimericantigenreceptorT-cellimmunotherapy），即嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法。它是一種醫(yī)治種瘤的新型精確靶向療法，能夠精確、高效，且有希望治好ai癥的免疫醫(yī)治方法。目前，主要有兩...

復(fù)制性慢病毒/復(fù)制性逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測的背景：慢病毒載體來源于病原體HIV-1，為了保證產(chǎn)品的安全性，目前基因醫(yī)治產(chǎn)品所用的慢病毒載體/逆轉(zhuǎn)錄病毒載體均為非復(fù)制性。通過將基因組中的輔助蛋白刪除，并將結(jié)構(gòu)基因分別通過3-4個(gè)質(zhì)粒系統(tǒng)進(jìn)行分別包裝，形成三質(zhì)粒系統(tǒng)或者四...

為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測？近年來熱度驟增的生物制品藥物對諸多疾病療效斐然，在藥品市場中所占比重也是節(jié)節(jié)攀升。于是生物制品與之俱來的生物安全性問題被漸漸提上日程，其中宿主細(xì)胞殘留DNA由于可能會傳遞仲瘤或病毒相關(guān)基因，存在潛在的危險(xiǎn)性，各國藥品監(jiān)督管理機(jī)...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的Vero宿主細(xì)胞殘留DNA檢測試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的Vero宿主細(xì)胞DNA，產(chǎn)品具備檢測快速、操作簡單、特異性強(qiáng)、檢測靈敏度高、穩(wěn)定性好、能防止PCR產(chǎn)...

美國藥典（USP）對宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的規(guī)定：美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品宿主細(xì)胞DNA殘余限度不得超過100pg/劑量，對于大劑量的如單克隆抗體的生物制品，根據(jù)其殘余DNA來源及給藥途徑，DNA殘留量可放寬至10ng/...

基于細(xì)胞培養(yǎng)法和qPCR快檢法都能實(shí)現(xiàn)對重組腺相關(guān)病毒載體(rAAV)中復(fù)制型腺相關(guān)病毒(rcAAV)的污染率的檢測，但兩者在實(shí)際檢測中都存在檢測值不夠準(zhǔn)確的風(fēng)險(xiǎn)（基于細(xì)胞培養(yǎng)法存在低于實(shí)際值的風(fēng)險(xiǎn)qPCR快檢法存在高于實(shí)際值的風(fēng)險(xiǎn)）。南京正揚(yáng)生物科技有限公司...

宿主細(xì)胞殘留DNA是影響生物制品安全性的關(guān)鍵因素之一，它不僅會降低生物藥的有效性，還可能帶來傳染性或致瘤性等安全問題。因此建立合適的宿主細(xì)胞殘留DNA檢測方法有助于監(jiān)測生產(chǎn)工藝，確保生物制品的安全性和質(zhì)量。各國藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對宿主細(xì)胞殘留DNA的殘留量有著嚴(yán)...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①如出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象：反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機(jī)前確保管蓋密閉，反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān)，需咨詢硬件供應(yīng)商解決...

qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測的原理：PCR反應(yīng)過程中可通過熒光標(biāo)記的特異性探針檢測PCR產(chǎn)物量。帶有一對熒光分子的探針與樣品中DNA通過堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，Taq聚合酶合成DNA，同時(shí)沿5’-3’方向水解DNA探針，一對熒光分子隨...

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)在生物制品質(zhì)量控制方面應(yīng)用非常普遍，如宿主細(xì)胞殘留DNA檢測，鼠源、禽源等外源病毒檢測，微生物快檢（支原體、分枝桿菌、細(xì)菌、***等），復(fù)制型病毒檢測（RCL、RCR、rcAAV等）、質(zhì)?？截悢?shù)檢測及其它工藝雜質(zhì)檢測等。qP...

基于細(xì)胞培養(yǎng)法的rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測方法，該方法的原理是通過不斷的細(xì)胞傳代使得rcAAV實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增，之后再利用qPCR或Southern-blot的方法對rcAAV進(jìn)行檢測，能保證檢測到的rcAAV都具有復(fù)制能力，是目前常用的檢測方法。然而，其檢測敏感...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測過程中，qPCR反應(yīng)體系配制環(huán)節(jié)有哪些注意事項(xiàng)？①qPCR的整個(gè)操作要低溫環(huán)境進(jìn)行，防止模板的降解，試劑避免反復(fù)凍融。②配制反應(yīng)體系前試劑要充分混勻，除了模板外的反應(yīng)體系要統(tǒng)一配制，然后再分配至qPCR管中，配制的時(shí)候考慮到操作或耗材帶來...

用qPCR進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測時(shí)，哪些因素會對檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響？參考品DNA量值溯源及質(zhì)量保證：參考品DNA的量值準(zhǔn)確與否，直接關(guān)系到樣品檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此需制定完善的參考品量值溯源程序，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠。參考品DNA的質(zhì)量要求...